【摘 要】
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目的比较研究猪深/浅层真皮组织、脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）、真皮成纤维细胞（dermal fibroblast,DF）的致纤维化能力方法（1）利用气动取皮刀将雌性红色杜洛克猪猪背真皮组织水平切割为深、浅层真皮组织,用于:提取深、浅层DF;制备深、浅层ADM;后续创面模型的制作;制作雌性红色杜洛克猪自体回植深、浅层真皮组织/ADM/DF的创面模型;利用H
【基金项目】
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国家自然科学基金（81071566,81000838）； 国家重点基础研究发展规划项目（973项目）（No.2012CB518105）；
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目的比较研究猪深/浅层真皮组织、脱细胞真皮基质（acellular dermal matrix,ADM）、真皮成纤维细胞（dermal fibroblast,DF）的致纤维化能力方法（1）利用气动取皮刀将雌性红色杜洛克猪猪背真皮组织水平切割为深、浅层真皮组织,用于:提取深、浅层DF;制备深、浅层ADM;后续创面模型的制作;制作雌性红色杜洛克猪自体回植深、浅层真皮组织/ADM/DF的创面模型;利用H&E染色测量深、浅层真皮/ADM组各时相点的皮肤标本中真皮组织厚度;利用H&E染色测量深、浅层DF组和对照组皮肤标本中新生纤维带的厚度;利用免疫印迹分析（Western blot analysis,WB）检测各组皮肤标本中α-平滑肌肌动蛋白（alpha-smooth muscle actin,α-SMA）的表达;（2）利用电镜观察深、浅层DF的形态和超微结构;利用免疫细胞化学观察两种细胞中α-SMA的阳性率;利用羟脯氨酸法测量两种细胞上清液中胶原含量;利用WB检测两种细胞中α-SMA的表达;利用实时荧光定量PCR（Real-time polymerase chain reaction,Real-time PCR）检测两种细胞中α-SMA基因和Ⅰ型前胶原基因的表达。结果（1）H&E染色结果表明,深层真皮组各时相点皮肤标本中真皮组织厚度明显大于浅层真皮组,相反,深层ADM组各时相点皮肤标本中真皮组织厚度明显小于浅层ADM组;深层DF组皮肤标本中新生纤维带的厚度明显大于浅层DF组和对照组;（2）电镜结果表明,深、浅层真皮组织、ADM和DF的形态和结构有明显区别;免疫细胞化学结果表明,深层DF中α-SMA的阳性率明显高于浅层DF;（3）WB结果表明,深层真皮组各时相点皮肤标本中α-SMA的表达明显高于浅层真皮组,相反,深层ADM组各时相点皮肤标本中α-SMA的表达明显低于浅层ADM组;深层DF组皮肤标本中α-SMA的表达明显高于浅层DF组和对照组;体外培养的深层DF中α-SMA的表达明显高于浅层DF;（4）羟脯氨酸法测量结果表明,体外培养的深层DF的胶原分泌能力明显强于浅层DF;Real-time PCR结果表明,深层DF中α-SMA基因和Ⅰ型前胶原基因的表达高于浅层DF。结论猪深层真皮组织和DF的致纤维化能力大于浅层真皮组织和DF,相反,深层ADM的致纤维化能力弱于浅层ADM;像人DF一样,猪深、浅层DF在形态和功能上具有明显差异。
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