DNA的COC微流控芯片电泳分离及经济型紫色二极管激光诱导荧光检测器的研制

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随着人们对公共卫生和食品安全关注度的提高以及现场分析需求的不断增加,微型化、高灵敏度的现场分析检测手段成为了分析化学研究的重要内容之一。微全分析系统具有试剂和样品消耗量小、分析速度快等优点,是生命分析和现场分析的理想手段,但目前用于微流控分析的检测器往往体积较大、成本较高,研究新型的高灵敏度、易微型化的检测器是微全分析系统用于现场分析的重要步骤之一。激光诱导荧光检测(LIF)是一种微流控分析常用的检测手段,但传统的激光价格高、体积大,不适合现场使用。为了降低成本,发光二极管(LED)被用作荧光检测器的激发光源,但这类检测器的灵敏度往往不够理想。本论文初步探索了LIF检测的聚环烯烃(COC)芯片电泳分离DNA的可能性,然后以市售的紫色激光二极管为光源组装廉价的激光诱导荧光检测器,并考察了它的性能和应用。全文共四章:第一章简述了微流控技术,包括芯片的制作以及芯片在电泳分析中的应用。对微流控电泳技术在DNA样品中的应用进行了阐述,总结了用于DNA分离的微流控设备、筛分介质种类、筛分介质性质以及常见染料对分离的影响。对常见的用于微流控分析的检测器进行了概述,比较了不同检测器的优缺点。第二章采用SYBR Green I作为插入染料,考察了用于DNA分离的常见筛分介质,如羟丙基纤维素(HPC)、羟乙基纤维素、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、线性聚丙烯酰胺等在COC芯片上对该Φx174-Hae Ⅲ酶切DNA片段电泳分离的影响。发现在COC材料的芯片上,HPC具有较好的筛分性能,经过优化添加剂浓度,发现了当HPC浓度为2%时具有较好的筛分性能。接着考察了分离电压对于该DNA片段分离的影响,结果证明1.1kV时分离效果较好。第三章尝试用市售的廉价紫色激光二极管作为荧光检测器的激发光源,以普通光电倍增管作为光电转换装置,组装共聚焦光学结构的激光诱导荧光检测器。考察了物镜放大倍数、滤光片、光源电流和增益大小等条件对于仪器分析性能的影响,并用荧光胺和FITC衍生的氨基酸、罗丹明类染料、荧光素等物质对仪器灵敏度进行了表征,得到该仪器对荧光胺衍生的亮氨酸的最低检出浓度为0.02nmol L-1,对于罗丹明B和荧光素的检出限分别为9.5nmol L-1和1.0molL-1,相对文献报道的其它廉价激发光源的检测器,该检测器在保持了低成本优势同时具有高灵敏度的优点,而且可用于多类的染料标记物的分析检测。第四章、将前一章所述的激光诱导荧光检测器应用于荧光胺衍生的氨基酸样品、种子浸出液、氟喹诺酮类药物、甲萘酚磺化产物、量子点等各类样品的COC芯片电泳分离分析中,优化了氨基酸样品的分离条件,进一步证实了该检测器在荧光检测中的适用性。
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