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本研究通过探讨不同浓度白藜芦醇(Resveratrol,RES)对绵羊卵母细胞体外成熟、体外受精、早期胚胎体外发育以及对卵母细胞抗氧化能力和卵丘细胞分泌类固醇激素(雌二醇和孕酮)含量的影响。研究发现,适量RES对绵羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育有积极作用。为进一步优化绵羊卵母细胞体外培养环境体系,进而提高绵羊卵母细胞体外成熟和胚胎体外发育效率,为绵羊体外受精胚胎体外发育机理提供理论依据。主要研究结果如下:
一、不同浓度RES对绵羊卵母细胞体外成熟的影响
在卵母细胞体外成熟液中分别添加0、0.5、2.0、5.0μmol/LRES,结果显示,与对照组和RES各浓度处理组进行对比,0.5μmol/LRES处理组显著提高卵母细胞第一极体的形成和卵母细胞胞质中GSH水平(P<0.05),并显著降低ROS水平(P<0.05)。添加浓度增至5.0μmol/L卵丘扩展率、第一极体排出率、胞质内GSH水平显著下降(P<0.05)。因此,在绵羊卵母细胞IVM液中添加0.5μmol/LRES,降低细胞胞质ROS水平及提高GSH水平,提高绵羊卵母细胞体外成熟质量,并高浓度5.0μmol/LRES对绵羊卵母细胞体外成熟有抑制作用。
二、不同浓度RES对绵羊卵母细胞体外成熟培养基中抗氧化酶活力及激素含量的影响
研究结果表明,卵母细胞体外成熟液中添加0.5μmol/L和2.0μmol/LRES增加SOD和GSH-Px酶活力,但与对照组相比之间没有显著差异(P>0.05),并显著降低MDA含量(P<0.05);5.0μmol/LRES显著降低抗氧化酶SOD和GSH-Px活力以及提高MDA含量(P<0.05)。此外,不同浓度的RES对卵丘细胞分泌E2含量有一定的抑制作用,随浓度的升高而逐渐降低,高浓度5.0μmol/LRES显著降低E2含量(P<0.05);同时,与对照组相比,0.5μmol/LRES显著提高P4分泌量(P<0.05),RES各处理组之间无显差异(P>0.05)。
三、不同浓度RES对绵羊卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响
在卵母细胞IVM液中分别添加0、0.5、2.0、5.0μmol/LRES,研究发现,与对照组相比,添加浓度为0.5μmol/LRES能够促进体外受精胚胎的发育潜能,并分别提高受精率、卵裂率和囊胚率,但之间无显著差异(P>0.05)。在IVM/IVC液中添加最佳浓度0.5μmol/LRES促进胚胎体外发育,显著提高体外受精胚胎卵裂率及囊胚率(P<0.05)。
在绵羊卵母细胞体外成熟液中添加0.5μmol/LRES显著提高卵母细胞第一
极排出率和细胞胞质内GSH水平以及减少ROS水平,进而提高卵母细胞体外成熟质量。0.5μmol/LRES通过提高抗氧化酶活力,并增加卵丘细胞分泌P4含量,进而可促进卵母细胞体外成熟效率。此外,0.5μmol/LRES显著提高绵羊早期胚胎发育能力;高浓度5.0μmol/LRES对卵母细胞体外成熟以及早期胚胎发育有不利影响。
一、不同浓度RES对绵羊卵母细胞体外成熟的影响
在卵母细胞体外成熟液中分别添加0、0.5、2.0、5.0μmol/LRES,结果显示,与对照组和RES各浓度处理组进行对比,0.5μmol/LRES处理组显著提高卵母细胞第一极体的形成和卵母细胞胞质中GSH水平(P<0.05),并显著降低ROS水平(P<0.05)。添加浓度增至5.0μmol/L卵丘扩展率、第一极体排出率、胞质内GSH水平显著下降(P<0.05)。因此,在绵羊卵母细胞IVM液中添加0.5μmol/LRES,降低细胞胞质ROS水平及提高GSH水平,提高绵羊卵母细胞体外成熟质量,并高浓度5.0μmol/LRES对绵羊卵母细胞体外成熟有抑制作用。
二、不同浓度RES对绵羊卵母细胞体外成熟培养基中抗氧化酶活力及激素含量的影响
研究结果表明,卵母细胞体外成熟液中添加0.5μmol/L和2.0μmol/LRES增加SOD和GSH-Px酶活力,但与对照组相比之间没有显著差异(P>0.05),并显著降低MDA含量(P<0.05);5.0μmol/LRES显著降低抗氧化酶SOD和GSH-Px活力以及提高MDA含量(P<0.05)。此外,不同浓度的RES对卵丘细胞分泌E2含量有一定的抑制作用,随浓度的升高而逐渐降低,高浓度5.0μmol/LRES显著降低E2含量(P<0.05);同时,与对照组相比,0.5μmol/LRES显著提高P4分泌量(P<0.05),RES各处理组之间无显差异(P>0.05)。
三、不同浓度RES对绵羊卵母细胞体外受精及早期胚胎发育的影响
在卵母细胞IVM液中分别添加0、0.5、2.0、5.0μmol/LRES,研究发现,与对照组相比,添加浓度为0.5μmol/LRES能够促进体外受精胚胎的发育潜能,并分别提高受精率、卵裂率和囊胚率,但之间无显著差异(P>0.05)。在IVM/IVC液中添加最佳浓度0.5μmol/LRES促进胚胎体外发育,显著提高体外受精胚胎卵裂率及囊胚率(P<0.05)。
在绵羊卵母细胞体外成熟液中添加0.5μmol/LRES显著提高卵母细胞第一
极排出率和细胞胞质内GSH水平以及减少ROS水平,进而提高卵母细胞体外成熟质量。0.5μmol/LRES通过提高抗氧化酶活力,并增加卵丘细胞分泌P4含量,进而可促进卵母细胞体外成熟效率。此外,0.5μmol/LRES显著提高绵羊早期胚胎发育能力;高浓度5.0μmol/LRES对卵母细胞体外成熟以及早期胚胎发育有不利影响。