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目的:为了进一步补充和完善我国静注人免疫球蛋白(intravenous immunoglobulin,IVIG)(pH4)制品的质量评价体系,分别建立IVIG中抗体的多样性和Fc段(Fragment crystallizable region,Fc region)生物活性检测方法;并利用上述建立的方法,开展我国主要血液制品厂家IVIG制品的抗体多样性及Fc段功能的研究。本研究为进一步保障我国IVIG制品的质量提供技术支撑与数据基础。方法:1、利用双向电泳技术结合蛋白免疫印迹方法,以大肠杆菌0157:H7总蛋白为抗原,开展我国IVIG制品抗体谱的多样性研究,并利用质谱方法对IVIG的目标抗原进行鉴定;2、优化药典载录的IVIG Fc段生物学活性(激活补体活性)检测方法,开展我国IVIG制品Fc段激活补体活性的研究;3、建立基于流式细胞术的IVIG Fc段生物学活性(结合受体活性)分析方法,开展我国IVIG制品Fc段结合受体活性的研究;利用高效液相色谱方法分析IVIG中IgG二聚体含量,比较IgG二聚体含量与Fc段结合受体活性的关系。结果:本研究成功建立了稳定性良好的IVIG抗体谱及Fc段生物学活性评价方法,并利用该方法对国内外厂家IVIG制品分析,结果如下:1、国内8个厂家IVIG制品识别反应的抗原蛋白点为156±48个,而国外Octapharma公司的IVIG识别反应的抗原点为124个。选取33个与IgG发生免疫反应的抗原蛋白进行质谱分析,经鉴定为29种大肠杆菌蛋白,且这些蛋白在多种病原微生物中高度保守;2、所有厂家IVIG制品中均检测到有针对白喉类毒素的Fc段激活补体活性,均高于60%,符合《欧洲药典》的检定要求,但各厂家IVIG Fc段激活补体活性各不相同;国内各厂家IVIG Fc段激活补体活性与A厂家比较,F*>H*>G*>A>C>I>D*>E*>B*(“*”表示 p<0.01,差异显著);3、所有厂家IVIG制品Fc段结合受体活性各不相同,同一厂家不同批次IVIG样品Fc段结合受体活性也有所不同,但均高于60%;与A厂家比较,部分厂家呈现显著性差异;4、IVIG制品中二聚体含量与其Fc结合受体能力无相关性。结论:1、本研究建立的针对IVIG的抗体谱多样性和Fc段生物学活性的评价体系,可有效用于IVIG制品针对病原微生物抗体多样性的检测评价,以及从Fc段结合受体、激活补体能力两个方面分析IVIG Fc段功能,上述评价体系为保障IVIG的有效性提供了技术支撑;2、利用建立的方法对我国主要厂家的IVIG制品进行了检测,结果表明参与研究的国内IVIG制品中均具有针对大肠杆菌O157:H7的广谱抗体,但识别抗原的数量、种类存在差异;各厂家IVIG制品Fc段生物学活性均不相同,部分厂家存在显著性差异。说明目前市售的IVIG制品临床有效性可能存在差异;3、补充并完善现有的血浆蛋白质品质量评价体系,有助于更加深入分析产品特点,为指导临床选择用药、提升血浆蛋白制品质量提供保障。