甘蓝型油菜-萝卜d染色体附加系(Rape-radish with d-chromosome addition line，AACC^+dd，2n=40)是通过甘蓝型油菜（Brassica nupus，AACC，2n=38）与萝卜（Raphanus sativus，RR，2n=18）的杂交，经杂种染色体加倍与母本多次回交获得的具萝卜d染色体的新型油菜材料。Peterka研究发现萝卜9条染色体中——d染色体具有抗线虫效应，而芸薹属（Brassica．CC，2n=18）植物则容易受线虫病侵染。本试验目的希望通过甘蓝型油菜-萝卜d染色体附加系与甘蓝的有性杂交，能够获得具有萝卜d染色体的杂种后代，为选育具线虫抗性的新型甘蓝品种提供相关品种材料。甘蓝型油菜-萝卜d染色体附加系与甘蓝的杂交存在远缘杂交障碍，本试验选取染色体数目较多的附加系为母本、甘蓝为父本进行有性杂交，并通过人工干涉来促进亲和性提高。电镜观察父本花粉在附加系柱头上的萌发情况，异源花粉刺激柱头乳突细胞产生大量胼胝质以抵制花粉管的侵入，部分花粉管受阻，但仍有部分进入柱头并与胚珠结合。花粉管能与雌配子结合是有性杂交成功的先决条件。在田间去雄授粉试验中，以甘氨酸（Gly 100mg/L）、赤霉素（GA₃ 60mg/L）、重复授粉及无特殊处理对照（CK）对柱头进行处理，发现：三种特殊处理方式对促进杂交亲和性都有一定作用。其中GA₃ 60mg/L能有效提高结籽率，重复授粉对促进结角效果最好。胚胎挽救可为胚的形成提供必要的养分和激素。本试验以不同发育天数的受精子房为培养对象，在不同培养基上进行子房培养，共获得26粒种子，并对不同子房天数和培养基效果进行比较：（1）普遍以10天左右的受精子房进行子房培养可获得高结籽率。（2）子房在“White（1963）+VB₆（0．5mg／L）+VB₁（0．5mg/L）+甘氨酸（15mg/L）+烟酸（2．5mg/L）+IAA（1．5 mg/L）+蔗糖（50g／L），pH=5．6”和“1／2MS+B5维生素+IAA（1．5mg/L）+蔗糖（50g/L），pH=5．8”这两种培养基上均能获得较高的结籽率，分别为3．37和4．26。田间与离体培养获得的再生植株在形态学上偏向母本，个别形态标记如叶片形状等处于父母本中间型，极少数植株出现不同于父母本的浅紫色茎杆。利用已知萝卜d染色体的特异分子标记引物OPE07-363与OPE03-518对子代与父母本DNA进行RAPD实验，筛选出在363bp与518bp处有与母本d染色体特异带型相同的子代植株4株，并通过SSR标记与根尖细胞染色体计数来鉴定杂种真实性。经鉴定，子代植株DNA模板经与引物结合、PCR扩增电泳后于167bp与248bp处显示出不同于父母本的差异带型；对4株再生苗中存活的3株进行细胞学鉴定，显微镜下观察到根尖染色体数目分别是：29、29、48（或49）。即3株再生苗：2株三倍体(ACC^+d，3x=29)，和1株五倍体(AACCC^+dd，5x=49)或(AACCC^+d，5x=48)。从而确定这三株植株确为附加系do×甘蓝的真杂种。花粉活力高低是决定植株育性的重要因素之一。醋酸洋红可与脱氢辅酶结合显红色，不具活力的花粉由于缺失脱氢辅酶从而不能染色。本试验将染色后的子代花粉与父母本相比较，子代花粉具有一定育性，但育性低，仅为11．32％；但有活力的子代花粉体大饱满，染色情况较父母本深，形态处于母父本花粉形态中间型。