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目的:采用转基因的方法,构建人工心脏房室传导束,以为将来采用生物工程的方法来治疗房室传导阻滞。
方法:⑴分离大鼠的骨髓间充质干细胞,采用慢病毒载体转基因上调骨髓间充质干细胞Notchl活性片段的表达,并把它植入大鼠心肌内,免疫荧光检测有无传导细胞标记物SNAP-25、HNK-1的表达,以确定是否能采这种办法诱导骨髓间充质干细胞向传导细胞分化。⑵采用逆转录病毒转染MyoD和Connexin30.2进入大鼠骨骼肌成肌细胞,并采用免疫荧光检测细胞内肌球蛋白重链抗体和胞膜Connexin30.2缝隙连接蛋白的表达,以确定骨骼肌成肌细胞是否在MyoD的诱导下促使骨骼肌成肌细胞发生肌源性转化,以获得细胞膜的兴奋性;并表达决定房室结区传导延搁的缝隙连接蛋白,构建出具有房室结区细胞功能特点的传导细胞。
结论:①采用慢病毒转基因上调骨髓间充质干细胞notchl活性片段的表达并植入大鼠心肌内,尚不足以诱导其向传导细胞方向分化;②采用逆转录病毒转染MyoD和Connexin30.2进入大鼠骨骼肌成肌细胞,可以构建类似于心脏房室结区功能的细胞。