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背景与目的:
EB病毒(Epstein-barr virus,EBV)的感染与鼻咽癌的发生发展有着密切的关系,EB病毒相关抗体和EBV-DNA的检测已作为鼻咽癌早期诊断、疗效评价的一个指标。小檗碱(Berberine,BBR)或含BBR的中药复方在鼻咽癌防治中起重要作用。本文通过分析BBR处理后Raji细胞中EBV-DNA的变化量,探讨BBR对EBV-DNA复制的抑制作用。
方法:
选取带EB病毒的Raji细胞作为研究材料,运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分析BBR对Raji细胞生长的影响,选用BBR的细胞无毒性浓度(non-cytotoxic concentration,NCC)处理Raji细胞,同时测定培养基中LDH的含量,进一步确证BBR的NCC;采用巢式荧光定量PCR方法,在Mx3000p型检测仪上定量检测EBV-DNA的含量,分析BBR对EBV-DNA复制的影响。
结果:
1.MTT结果显示,BBR在10~100μol/l对Raji细胞增殖生长有明显的抑制作用(P<0.05),而在0~10μmol/l对Raji细胞生长增殖无明显影响(P>0.05),因此0~10μmol/l为BBR对Raji的细胞无毒性浓度(NCC)。
2.LDH结果表明,BBR在0~10μmol/l时处理Raji细胞,细胞培养基中LDH含量与空白对照组无明显差异。0~10μmol/l确为BBR细胞无毒性浓度范围(NCC),下部实验采用该浓度进行实验。
3.巢式荧光定量PCR分析EBV-DNA拷贝数结果表明,当BBR的浓度为40μmol/l、10μmol/l、1.25μmol/l时处理Raji细胞,细胞中EBV-DNA拷贝数显著降低(P<0.05)。
结论:
1.MTT结果和LDH检测结果均提示,0~10μmol/l为BBR的对Raji细胞的细胞无毒性浓度。
2.BBR可以抑制Raji细胞中EVB-DNA的复制。
3.BBR在0~10μmol/l范围对Raji细胞生长分裂和细胞生理活动无明显影响,在此浓度下BBR仍可以抑制Raji细胞中EBV-DNA的复制,这可能是BBR确切的药理学作用而非毒性作用。这为使用BBR或者含BBR的中药复方来防治鼻咽癌的提供了新的实验依据。