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目的:观察重组梅毒螺旋体(Tp)黏附素rTp0751、rTp0136~N、rTp0435单独免疫和三者联合免疫诱导C57BL/6小鼠产生特异性免疫应答水平及抑制Tp在小鼠体内播散情况,为筛选梅毒疫苗候选分子及建立新型梅毒疫苗动物模型提供依据。方法:诱导原核表达载体pET-30a-Tp0136~N、pET-30a-Tp0435以及pET-30a-Tp0751表达目的重组蛋白。将C57BL/6小鼠随机分为5个组(A:PBS组、B:rTp0136~N免疫组、C:rTp0435免疫组、D:rTp0751免疫组、E:rTp0136~N+rTp0435+rTp0751联合免疫组),取纯化重组蛋白与弗氏佐剂混合后对各组小鼠进行2周间隔的3次免疫,于免疫后第2周、4周、6周3个时间点免疫前采集尾部静脉血、分离血清,ELISA法检测血清特异性IgG抗体水平。取末次免疫后2周的小鼠脾脏,流式细胞术检测脾细胞胞内IL-4与IFN-γ含量。末次免疫3周后,采用皮下、灌胃、阴茎海绵体3点注射的方式对各组小鼠进行Tp攻击。攻击后42天,采用实时荧光定量PCR(qPCR)检测小鼠心、脾、脑组织中Tp的DNA载量。结果:表达的rTp0136~N、rTp0435、rTp0751经SDS-PAGE电泳分析,在预期位置有明显条带。各免疫组小鼠的血清特异性IgG抗体水平随免疫时间增加而逐渐升高并于首次免疫第6周(末次免疫后2周)达到峰值,各单独免疫组及联合免疫组均高于PBS对照组(P<0.01),但单独免疫组与联合免疫组之间无显著差异。流式细胞术检测脾细胞内IFN-γ、IL-4含量,结果显示各免疫组CD4~+IFN-γ~+含量高于PBS对照组(P<0.01),其中单独免疫组含量均高于联合免疫组(P<0.05);各免疫组CD8~+IFN-γ~+含量高于PBS对照组(P<0.01),单独免疫组与联合免疫组间无明显差异;免疫组和对照组小鼠可检测到的CD4~+T细胞产生IL-4水平均极低。qPCR检测Tp攻击感染后小鼠不同组织Tp-DNA载量显示:在脾脏与心脏中,除rTp0435免疫组外,其他各单独免疫和联合免疫组Tp载量低于PBS对照组(P<0.05),单独免疫组与联合免疫组之间无明显差异;在脑组织中,rTp0136~N、rTp0751免疫组Tp载量明显低于PBS对照组(P<0.05),rTp0435免疫组、联合免疫组与对照组之间均无明显差异。结论:1.重组黏附素Tp0136~N、Tp0435、Tp0751以及Tp0136~N、Tp0435、Tp0751联合免疫均能有效诱导小鼠产生特异性体液免疫与细胞免疫应答。2.重组黏附素Tp0136~N、Tp0751单独免疫以及Tp0136~N、Tp0435、Tp0751联合免疫能抑制Tp在小鼠体内播散,但联合免疫比单个免疫未能获得更好的免疫保护性。