中药药效物质基础研究是中药现代化的核心和难点,目前没有统一模式,传统方法是成分分离后进行活性测试或活性引导下追踪分离,采用传统方法确实阐明了一些中药的药效物质基础,但该法所确定的成分是否是药效的代表性成分有时有待商榷。首先,中药是多成分、多靶点的复杂体系,其药效往往是多种成分在不同靶点整合的结果,化学分离使这种整合作用消失；其次,传统的口服给药形式决定了中药中被吸收进入体内的物质才能产生活性,而且进入体内发挥作用的可能是原形成分,也可能是代谢产物。因此,有学者提出了基于“含药血清”的研究策略,其指导思想是：中药要在体内产生效应,其效应成分应在预期的时间里以有效的浓度到达靶器官或组织,且必须由用药部位进入血液循环,并以血液为介质输送到靶器官或组织,因而可以把给药后的血清(即含药血清)作为中药药效物质基础的研究对象。虽然吸收进入体内的成分不全是有效成分,但是经过胃肠道的处理,进入体内成分的种类和数目大大减少,这样可以简化中药复杂体系,而且其确定的有效成分是体内直接产生药效的物质基础。基于“含药血清”的中药药效物质基础研究策略包括“血清药理学(Serum Pharmacology)"和“血清药物化学(Serum Pharmacochemistry)"研究。“血清药理学”指将含药血清作用于体外细胞模型进行药效评价；“血清药物化学”指采用现代分析方法对含药血清中的药源性成分(包括体外原形成分和体内代谢产物)进行定性定量分析。两者相结合研究可以基本阐明中药的药效物质基础。五味子(Schisandra chinensis)是木兰科植物五味子Schisandra chinensis (Turcz.) Baill.的干燥成熟果实,含有多种化学成分,具有多种药理活性,其中联苯环辛烯类木脂素(又称五味子类木脂素)是其主要化学成分,也是主要活性成分,目前已从五味子中分离到该类成分50个。五味子类木脂素具有确切的保肝作用,其活性与结构有关,也与体内代谢过程有关,但对该类成分的构效关系及在体内真正发挥药效的物质基础目前的研究并无定论。因此,采用血清药化学方法研究五味子类木脂素的体内过程对阐明其保肝作用的药效物质基础及构效关系具有重要意义。有鉴于此,本课题在对五味子进行质量控制及提取工艺等研究的基础上,采用血清药化学方法及指纹图谱技术、LC-MS等检测手段,对大鼠灌胃给药后体内产生的原形五味子类木脂素成分及其代谢产物进行了定性定量研究。论文分文献综述和实验研究两大部分。第一部分,文献研究。引用文献83篇,综述了五味子化学成分及五味子类木脂素血清药化学研究进展,在此基础上简要介绍了本课题的研究思路和方案设计。第二部分,实验研究。包括以下内容：一、五味子质量控制及木脂素类成分提取工艺研究1、基于指纹图谱与一测多评法相结合的五味子质量评价方法研究采用HPLC法测定了12批五味子样品的指纹图谱,建立了指纹图谱共有模式,指纹图谱标定共有峰24个,通过对照品比对,指认了其中6个木脂素类成分分别为五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素。12批样品指纹图谱的相似度均大于等于0.991。以五味子醇甲为内参物,建立了五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素、五味子丙素与五味子醇甲的相对校正因子,一测多评法计算了各成分在12批样品中的含量。同时采用外标法测定了12批样品中以上6个木脂素类成分的含量,比较了计算值与实测值的差异,以验证一测多评法的准确性。结果表明,建立的相对校正因子重现性良好,采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著差异。2、五味子及其种子、果皮中6种木脂素类成分的含量比较采用HPLC法对五味子种子和果皮中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素等6种木脂素类成分进行了含量测定和分析比较。结果表明,五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素在种子中的含量占果皮和种子总含量的平均值分别为91.23%、87.49%、95.10%、90.76%、93.43%和90.54%。提示五味子中木脂素类成分主要存在于种子中。3、五味子种子中木脂素类成分提取工艺研究以五味子总木脂素类和6种主要木脂素提取量加权作为指标,以回流次数、回流时间、乙醇浓度和乙醇用量为考察因素,每个因素设3个水平,选用L9(34)正交表安排试验优选了五味子种子中木脂素类成分提取工艺,方差分析结果表明,回流次数、回流时间对木脂素类成分提取率有显著影响,乙醇浓度和乙醇无明显影响,最终优选的提取工艺为6倍量95%乙醇回流3次,每次60min。4、五味子种子提取物指纹图谱研究及木脂素类成分含量测定采用HPLC法测定11批五味子种子提取物的指纹图谱,建立了指纹图谱共有模式,11批样品指纹图谱标定了共有峰24个,通过对照品比对,指认了其中6个木脂素类成分分别为五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素、五味子乙素和五味子丙素。11批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均>0.994。采用与药材含量测定相同的一测多评与外标法相结合的方法,测定了提取物中上述6种木脂素类成分的含量,并对两种方法的测定结果进行了比较,结果表明,两种方法的测定结果无显著差异。二、五味子种子提取物血清药化学研究1、五味子种子提取物含药血清指纹图谱研究雄性SD大鼠一次性灌胃给予五味子种子提取物(折算成五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素的剂量分别为29.44、8.45、7.76和14.2mg/100g)后6h采集血浆,采用与五味子指纹图谱的相同的色谱条件测定了10批含药血浆HPLC指纹图谱,建立了指纹图谱共有模式,通过与空白血浆图谱比较,标定了10批含药血浆中代表药源性成分的共有峰16个,与提取物及对照品指纹图谱比对发现,16个共有峰中体内代谢产物9个,原形成分7个,其中4个原形成分分别被指认为五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素。2、五味子提取物及其含药血浆中木脂素类成分的UPLC-ESI/MS分析采用UPLC-ESI-MS对五味子种子提取物及其大鼠灌胃给药后的含药血浆中的药源性成分进行定性分析。结果发现,提取物中含五味子类木脂素29个,通过对照品比对,其中的5个分别被鉴定为五味子醇甲、五味子醇乙、五味子酯甲、五味子甲素和五味子乙素,参考相关文献推测了其余24个的结构。大鼠灌胃五味子种子提取物后,体内产生了28个药源性成分,其中原形成分17个,代谢产物11个,17个原形成分中4个被鉴定为五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素和五味子乙素,未检测到五味子酯甲,参考相关文献推测其余13个成分分别为异五味子醇甲、戈米辛D、巴豆酰戈米辛H、当归酰戈米辛H、戈米辛F、五味子酯乙、五味子酚、巴豆酰戈米辛P、Gomisin M1、表戈米辛O、戈米辛N、苯甲酰异戈米辛O和五味子丙素。参考相关文献推测11个代谢产物中的10个分别为7,8-顺二羟基-3-去甲基五味子醇甲、戈米辛H的异构体、戈米辛P、7,8-顺二羟基-2-去甲基五味子醇甲、戈米辛H、7,8-顺二羟基五味子醇甲、戈米辛(戈米辛的异构体)、Deangeloylgomisin B、五味子醇甲(五味子醇乙或五味子甲素)的代谢物、五味子乙素的代谢物；还有一个有待鉴定。3、五味子提取物中4种木脂素与其单体的药代动力学初步比较雄性SD大鼠,一次性灌胃给予五味子种子提取物、五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素后15min、30min、1h、2h、4h、6h、8h、10h、12h和24h采取血浆,通过比较醇提物和单体成分的血药浓度-时间数据,发现五味子醇甲和五味子醇乙的药动行为可能受其他木脂素成分的影响,延缓了体内代谢时间,提取物中五味子甲素和五味子甲素单体、提取物中五味子乙素和五味子乙素单体的药动行为相差不大,且除五味子甲素单体,其他成分均在24h未能在体内完全代谢,排出体外。以上结论,为下一步研究主要木脂素成分的药代动力学提供基础。