论文部分内容阅读
背景：病毒性心肌炎（VMC）是指嗜心性病毒感染引起的，以心肌非特异性问质性炎症为主要改变的心肌炎。目前该病呈增多之势，已成为危害人们健康的常见病。西医对本病的防治尚无十分有效的措施，而中医中药在诊治该病方面积累了丰富的经验，具有一定的优势。导师魏品康教授根据中医传统理论，结合自己多年临床经验，研制的益心饮口服液对病毒性心肌炎患者疗效较为肯定。 目的：本课题利用细胞培养和动物实验的方法，对该药防治病毒性心肌炎的机理进行探讨，旨在为该方的临床使用提供实验依据。 方法：实验包括体外和体内两部分。 取出生4d的SD幼鼠心室肌制备培养搏动心肌细胞，接种CVB3建立体外病毒性心肌炎模型。同时添加不同浓度的益心饮血清，分别在病毒感染后1、3、5d检测心肌细胞的搏动速率、乳酸脱氢酶释放、存活率，实验分5组进行。 选用体重20±2g的雄性Balb／c小鼠，随机分为6组，即：正常对照组、病毒模型组、黄芪对照组、益心饮低剂量组、益心饮中剂量组、益心饮高剂量组。除正常对照组外，均于实验当日在小鼠腹腔注射100TCID50／ml CVB3稀释液0.2ml以建立病毒性心肌炎模型。正常对照组腹腔注射0.2ml不含病毒的稀释液。实验当日在病毒接种30min后，灌胃黄芪口服液10g／kg．d、益心饮口服液10g／kg．d、5g／kg．d（相当于临床使用剂量）、2.5g／kg．d，正常组、模型组灌胃同体积的生理盐水，连续14d。逐日观察小鼠的一般状况，于第7d各组分别取6只、14d取剩余小鼠，眼眶取血制备血清，进行SOD和MDA检测。然后颈部脱臼处死，无菌摘取心脏，观察心肌组织病理及超微结构的变化，并以RT-PCR法检测心肌组织中穿孔素和颗粒酶BmRNA表达水平。 结果：与病毒对照组相比，益心饮血清中、高剂量组能够提高感染心肌细胞的搏动速率、降低乳酸脱氢酶的释放、增加细胞存活率（P＜0.05），随时间延长，这种差异更加明显（P＜0.01）。小鼠腹腔注射病毒造模后，除正常组外，其余各组小鼠多在3～5天出现腹泻、少食、精神萎靡、活动减少、背毛杂乱等病态表现。症状严重者可导致死亡，死亡多发生在5～13天。至第14天各组小鼠死亡数分别为0、12、6、6、4、2；感染病毒后第7、14d，多数小鼠心肌有单核细胞浸润及坏死等心肌炎改变，所有药物治疗组心肌炎性和坏死等病理改变均明显轻于病毒模型组（P第二军医大学硕士学位论文中文摘要<0.05或p<0.01）。益心饮治疗组SOD活性较模型组明显升高而MDA含量明显下降，且随药物浓度的增高差异更明显（尸<0.01）。半定量RT一PCR法显示，益心饮能够明显降低心肌组织中穿孔素和颗粒酶B mRNA表达（尸<0.01）。 结论:1、益心饮药物血清对感染柯萨奇B3病毒的SD幼鼠培养心肌细胞具有明显的保护作用。2、益心饮可以降低死亡率，改善VMC小鼠的一般状况，有效维护心肌纤维及膜系统的完整性，对心肌炎具有肯定的治疗作用。3、益心饮能减轻氧自由基对心肌膜脂质过氧化损伤反应。4、益心饮有明显的抗免疫损伤作用，可能是通过降低穿孔素和颗粒酶B mRNA的表达而发挥免疫调节的作用。 此外，本文运用祖国传统理论结合现代研究，分析了益心饮的组方用药特点，认为该方具有益气养阴、清热解毒之功效，进一步说明其防治病毒性心肌炎的有效性和广阔的应用前景。