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目的： 观察1，25(OH)2D3对软脂酸(PA)诱导胰岛素抵抗(IR)人脐静脉内皮细胞(HUVECs) NO产生及胰岛素信号传导通路Akt/eNOS的影响，明确1，25(OH)2D3对血管内皮细胞的保护作用，探讨1，25(OH)2D3改善内皮细胞胰岛素抵抗的分子机制。 方法： 1、含不同浓度PA(0.3，0.4，0.5，0.6，0.7，0.8，0.9 mmol/L)的DMEM培养基与HUVECs共同培养18h，并设置正常对照组，观察各组细胞形态和生长状态，CCK8法测定各组细胞活性;不同浓度PA预孵育HUVECs18h后，加入含胰岛素（终浓度为1×10-9mol/L）的无血清DMEM培养液继续培养12 h，收集培养液和提取细胞蛋白。采用葡萄糖氧化酶-过氧化物酶法(GOD-POD)检测培养液中葡萄糖浓度，鉴定胰岛素抵抗内皮细胞模型。 2、0.6mM PA诱导正常HUVECs18h后，不同浓度的1，25(OH)2D3(0，0.01，0.1，1，10，100nM)干预胰岛素抵抗内皮细胞1h，提取各组细胞蛋白检测peNOS(Ser1177)，pAkt(S473)的相对表达量;0.6mM PA诱导HUVECs18h后，建立胰岛素抵抗内皮细胞模型，设置正常细胞对照组，用1nM1，25(OH)2D3干预HUVECs不同时间（分别为15，30，60，120，240，480s），取细胞上清液用硝酸盐/亚硝酸盐荧光检测试剂盒检测NO分泌量。 3、0.6mM PA诱导HUVECs18h后，建立IR内皮细胞模型，设置正常细胞对照组，用1nM1，25(OH)2D3继续干预胰岛素抵抗内皮细胞不同时间(0.5h，1h，2h，4h，8h，16h)，Trizol法提取细胞mRNA，逆转录为cDNA后，荧光定量PCR法检测基因ET-1 mRNA和VDRmRNA的水平。 4、0.6mM PA诱导HUVECs18h后，建立IR内皮细胞模型，设置正常细胞对照组，用1nM1，25(OH)2D3继续干预胰岛素抵抗内皮细胞1h，细胞免疫荧光法检测VDR在各组细胞的表达及分布。 结果： 1.正常HUVECs为椭圆形或梭形，呈鹅卵石铺路样，生长迅速。PA干预后HUVECs形态不规则，细胞折光度低，细胞内颗粒增多，生长缓慢，贴壁细胞减少。不同浓度的PA培养HUVECs18h后，在PA浓度为0.4-0.8mM时，细胞增殖活力逐渐下降，各组与对照组相比，差异有统计学意义（p均＜0.01）。与正常对照组相比，人脐静脉内皮细胞经PA孵育后，当PA浓度为0.3-0.8mM时PA干预组细胞外葡萄糖消耗显著降低，差异有统计学意义（p均＜0.01）。PA干预HUVECs18h，浓度为0.6mM时，葡萄糖消耗量最少(0.4210±0.0134 mmol/mg vs1.0923±0.1693 mmol/mg，p＜0.01)，该状态所对应的药物浓度即为造成胰岛素抵抗细胞模型的最佳浓度。 2.Western Blot结果显示:不同浓度的125(OH)2D3(0.01，0.1，1，10，100nM)干预胰岛素抵抗内皮细胞1h后peNOS，pAkt表达量增加，在1nM时表达量最高，与PA干预组相比有统计学意义(0.1173±0.0225 vs0.0682±0.0040，0.9260±0.2770 vs0.4432±0.0046,p＜0.05)。 3.NO检测结果:与正常组比较，PA干预组HUVECs NO产量明显减少(0.5065±0.0301μM vs0.7102±0.0438μM，p＜0.01)。与PA干预组比较，VD+PA干预组HUVECs NO产生增加，其中在30s和60s时差异有统计学意义（p均＜0.01）。 4.荧光定量PCR结果显示:0.6mM PA干预内皮细胞后，ET-1 mRNA相对表达量较正常对照组明显升高，差异有显著性意义(4.52E-04±1.13E-04 vs3.18E-05±9.47E-06，p＜0.05)。与PA干预组比较，VD+PA干预组ET-1 mRNA的水平明显降低，在0.5h，1h，2h，4h，8h，16h均有统计学差异（p均＜0.05）。VDR mRNA的水平各组间差异无统计学意义(p＞0.05)。 5.细胞免疫荧光结果显示:VDR在各组细胞核和细胞质都有表达;与正常组比较，PA干预组VDR表达呈减弱的趋势，差异无统计学意义(平均光密度值1.428±0.027 vs1.632±0.112，p＞0.05); VD+PA组与PA干预组比较差异无统计学意义（平均光密度值1.428±0.027 vs1.434±0.112，p＞0.05）。 结论： 1，25(OH)2D3可促进PA诱导的胰岛素抵抗内皮细胞pAkt/peNOS/NO合成，同时降低ET-1的水平，改善血管内皮细胞胰岛素抵抗。