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目的 观察不同浓度酒精对H9C2心肌细胞的影响以及胡黄连苷Ⅱ对H9C2心肌细胞酒精诱导的损伤的保护作用。 方法 H9C2心肌细胞在加入10%胎牛血清和双联抗生素的高糖DMEM培养基中于37℃,5%的二氧化碳培养箱中培养48小时。随机分为以下5组:正常对照组(Control)、酒精组(alcohol)、胡黄连苷Ⅱ-8组(picrosideⅡ1)、胡黄连苷Ⅱ-40组(picrosideⅡ2)、胡黄连苷Ⅱ-200组(picrosideⅡ3);其中酒精组以不含酒精的DMEM培养液培养细胞24h后,在以酒精浓度为200mmol/L的DMEM培养液培养细胞24h后收取细胞及细胞培养液;胡黄连苷Ⅱ-组以分别含胡黄连苷Ⅱ8、40、200mg/L的DMEM培养液培养细胞24h后,在以酒精浓度为200mmol/L的DMEM培养液培养细胞24h后收取细胞及细胞培养液。采用MTT法检测不同浓度胡黄连苷Ⅱ及酒精对H9C2细胞存活力的影响,在490nm测定吸光度,无细胞的孔作为空白对照。采用相应的试剂盒来分别检测LDH,MDA,SOD,Gpx的活性。采用ROS试剂盒标记细胞内活性氧,并使用倒置荧光显微镜检测细胞内活性氧的含量。 结果 1、形态学改变:显微镜下观察细胞形态刚接种的心肌细胞成球形,24h后,大部分细胞已经贴壁、逐渐扩展,呈类三角形或不规则的星形,细胞伸出伪足,并相互交接成网;酒精组细胞形态不一,漂浮细胞较多。 2、细胞存活率:(1)不同浓度胡黄连苷Ⅱ(0.32-1000mg/L)处理细胞48h对细胞的存活率无明显影响;(2)酒精以浓度依赖的方式导致细胞的存活率下降从100mmol/L时开始有统计学意义(P<0.05),200mmol/L时细胞存活率下降更为明显;(3)胡黄连苷Ⅱ预处理细胞24h可以浓度依赖的方式提高酒精所导致的细胞存活率的下降,从8mg/L开始有统计学意义(P=O.016),1000mg/L与200mg/L时比较生存率未明显增加(P>0.05)。 3、LDH活性:胡黄连苷Ⅱ预处理细胞24h可以浓度依赖的方式降低酒精所导致的上清液中LDH的升高。 4、MDA含量:200mmol的酒精可导致细胞内MDA含量的升高,而胡黄连苷Ⅱ预处理细胞24h可以浓度依赖的方式降低酒精所导致的MDA的升高。 5、SOD及Gpx活性:200mmol的酒精可导致细胞内SOD及Gpx活性的降低,而胡黄连苷Ⅱ预处理细胞24h可以浓度依赖的方式提高酒精所导致的细胞内SOD及Gpx活性的降低。 6、ROS活性:200mmol的酒精可导致细胞内荧光强度增加,而胡黄连苷Ⅱ预处理细胞24h可以浓度依赖的方式降低酒精所导致的细胞内荧光强度增加。 结论 1.胡黄连苷Ⅱ对正常培养的H9C2心肌细胞存活率无影响。 2.酒精对H9C2心肌细胞以浓度依赖的方式导致细胞存活降低。 3.胡黄连苷Ⅱ对酒精所致H9C2心肌细胞氧化应激损伤具有剂量依赖性保护作用,其保护作用部分是通过增加SOD、Gpx,降低MAD、ROS从而提高细胞的抗氧化能力,减轻脂质过氧化来实现的。