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油菜是重要的油料作物之一。新疆野生油菜是野芥(Sinapis arvensis)分布在中国新疆的一个自然群体,它生长势强,抗病虫害、抗菌核病能力强,具有不育胞质,是油菜育种的优良野生种质资源。甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系(B.napus-Sarvensis disomic alien addition line)是新疆野生油菜18号与甘蓝型油菜(Br assicanapus)品种中双4号原生质体融合,连续4次回交后得到的新型油菜恢复系,它具有一对来源于新疆野生油菜的染色体,该染色体上携带育性恢复基因,克隆该恢复基因对探索油菜育性恢复机制、培育优良转基因油菜恢复系具有重要的科学意义和生产价值。本研究构建了新疆野生油菜基因组BAC文库,并以甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系BAC文库为材料,对筛选新疆野生油菜染色体来源的BAC克隆进行了研究。研究结果如下:
新疆野生油菜基因组BAC文库的构建:用低熔点琼脂糖包埋细胞核的方法制备高分子量DNA, HindⅢ酶切,电洗脱回收100-300kb大片段DNA,与pCC1BACHTM载体连接,用0.025μm的透析膜悬浮在10%的PEG8000中冰上脱盐浓缩,转化E. coilEP1300感受态细胞,得到新疆野生油菜基因组BAC文库,保存在38块384孔板中。随机挑取100个克隆,用NotI酶切,脉冲电泳检测插入片段大小,插入片段在50-250kb之间,平均插入片段105kb,该文库共有14592个克隆,覆盖了新疆野生油菜基因组4.3倍。
野生油菜特定染色体来源BAC克隆的筛选:以新疆野生油菜基因组DNA为探针,直接对甘蓝型油菜-新疆野生油菜二体异附加系BAC文库的克隆进行菌落原位杂交,以期获得野生油菜特定染色体来源的BAC克隆,但未获得理想的结果,下一步需要以合适剂量的甘蓝型油菜基因组DNA进行封阻等方法继续开展相关研究。