HER-2/neu小分子干扰RNA对脑膜瘤细胞增殖活性的影响

来源 :南昌大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:michael_lv
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目的:本课题将化学合成的特异性HER-2/neu小分子干扰RNA(HER-2siRNA)瞬时转染至HER-2(人表皮生长因子受体-2)阳性的原代培养的人脑膜瘤细胞中,观察其对离体脑膜瘤细胞增殖活性的影响。方法:本课题收集外科手术切除的新鲜人脑膜瘤组织进行原代培养,用免疫细胞化学法筛选出HER-2抗体阳性的病例作为实验对象,然后将化学合成的特异性HER-2siRNA瞬时转染至体外培养的HER-2阳性的人脑膜瘤细胞,实验分为四组:特异性HER-2siRNA组;阴性对照siRNA组;脂质体组;细胞对照组。用MTT法直接测定转染前后脑膜瘤细胞增殖活性的改变;用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测转染前后脑膜瘤细胞中HER-2mRNA的水平;采用免疫细胞化学法(ICC)检测转染前后脑膜瘤细胞中HER-2蛋白的水平,以及反映细胞增殖活性的Ki-67蛋白水平;WesternBlot法检测转染前及转染后脑膜瘤细胞中HER-2蛋白的变化。探讨靶向阻断HER-2基因后脑膜瘤在细胞水平、RNA水平和蛋白水平表达的改变,从而观察HER-2基因与脑膜瘤生物学行为之间的关系。结果:特异性HER-2siRNA瞬时转染至体外培养的人脑膜瘤细胞后,MTT实验结果发现特异性HER-2siRNA从转染后48h开始对原代培养的人脑膜瘤细胞有抑制作用,其中转染后72h的抑制作用最强,细胞增殖抑制率可达50.08%,转染后96h的抑制作用与转染后72h比较没有显著差异;从RT-PCR实验结果可以看出,转染后72h,特异性HER-2siRNA组脑膜瘤细胞中的HER-2mRNA与GAPDH比值(即HER-2mRNA相对表达量)比空白对照组明显降低;转染后72h,免疫细胞化学结果显示特异性HER-2siRNA组脑膜瘤细胞中HER-2蛋白和Ki-67蛋白的表达较转染前明显减少;转染后72h,从Western Blot实验结果可以看出,特异性HER-2siRNA组脑膜瘤细胞中HER-2蛋白与GAPDH蛋白比值(即HER-2蛋白的相对表达量)较转染前明显减少。结论:在细胞水平,特异性HER-2siRNA可以地有效抑制体外原代培养的人脑膜瘤细胞的增殖,同时在RNA水平和蛋白水平亦可有效地抑制HER-2基因的表达。HER-2基因与原代培养的人脑膜瘤细胞的生物学行为有密切关系。这就为难治性或者复发性脑膜瘤使用特异性HER-2siRNA治疗提供了理论基础。
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