枯草芽孢杆菌JS01和黄芪多糖对建鲤生长及免疫功能的影响

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本试验以枯草芽孢杆菌和黄芪多糖为研究对象,分别研究了其单独、同时添加在饲粮中对建鲤生长及免疫功能的影响,旨在评估益生菌和多糖组成的合生元对水生动物生长及免疫功能的影响。主要内容包括:1、健康建鲤240尾,50.2±2.1g,分为4组,A、B、C和D,每组设4个重复,每个重复15尾鱼,分别饲喂基础日粮,基础日粮+2×107CFU/g枯草芽孢杆菌,基础日粮+500mg/kg黄芪多糖,基础日粮+2x107CFU/g枯草芽孢杆菌+500mg/kg黄芪多糖。分别于正式试验开始14d,28d,42d时,对各组建鲤称重,计算体增重%;对各组建鲤采肠道(中肠)、静脉注射取血液采血清样,测定肠道中淀粉酶、脂肪酶、胰蛋白酶等消化酶活性,血清中C3、C4、IgM含量,溶菌酶、SOD活性;42d时,取各组后肠内容物,采用PCR-DGGE技术进行肠道菌群多样性分析,取各组头肾进行荧光定量RT-PCR分析,检测相关免疫基因IL-1β,LZM-C和IL-8表达量。2、健康建鲤120尾,10.1±1.2g,分为4组,每组30尾,分别饲喂A、B、C和D饲粮。42d腹腔注射0.3mL6×108CFU/mL的嗜水气单胞菌液,攻毒后继续饲养15d,观察各组死亡数量,计算其存活率。结果如下:1、体增重(%)和存活率:与对照组(A组)相比,在饲粮中单独添加枯草芽孢杆菌组(B组)和黄芪多糖组(C组)可以促进建鲤的生长,42d时提高了29.06%和24.18%,差异显著(p<0.05);合生元D组高于A组,但差异不显著。在饲粮中单独添加枯草芽孢杆菌组(B组)和黄芪多糖组(C组)可以极显著地提高受嗜水气单胞菌感染后建鲤的存活率(p<0.01),分别提高了26.67%和23.34%。D组比A组存活率提高了9.67%,差异极显著(p<0.01)。结果表明单独或同时添加枯草芽孢杆菌JS01和黄芪多糖可以提高建鲤的体增重和存活率,且单独使用时效果更佳。2、肠道消化酶活性:B组建鲤中肠的淀粉酶活性在14d、28d、42d均极显著高于A、C、D组(p<0.01);D组仅在14d时淀粉酶活性显著高于A和C组(p<0.05),其余时间点均不显著。试验14和28天时,B、C、D三组的脂肪酶活性极显著高于A组,其中B和C组极显著高于D组(p<0.01)。14d和28d时,D组建鲤中肠中的胰蛋白酶活性极显著低于A、B、C三组(p<0.01),其中B组极显著高于A和C两组(p<0.01);42d时,B组的胰蛋白酶活性极显著高于A、C、D三组,其中C组极显著低于A组(P<0.01)。结果表明单独或同时添加枯草芽孢杆菌JS01和黄芪多糖可以提高建鲤肠道消化酶活性,且单独使用时效果更佳。3、采用PCR-DGGE技术分析肠道菌群多样性:42d时,不同的处理对建鲤肠道菌群有较大的影响。B、C和D组肠道菌群中的优势菌群有所增加,分别增加了6条、5条和2条,与A组的相似系数分别为:57%,56%,57%;B组与C组和D组的相似度分别为56%和73%,C组和D组的相似度为56%。结果表明单独或同时添加枯草芽孢杆菌JS01和黄芪多糖可以提高建鲤肠道菌群多样性,且单独使用时效果更佳。4、血清指标的测定:试验14d和28d时,A、B、C和D各组C3含量差异不显著;试验42d时,仅B组C3含量高于D组,差异显著(p<0.05)。试验14d时,B组C4含量显著高于C、D两组,其余均不显著;28d,42d时,D组C4含量均低于B和C组,差异显著(p<0.05)。试验14d时,A、B、C和D组建鲤血清中lgM的含量差异不显著;28d时,D组IgM含量低于A、B和C组,差异极显著(p<0.01),同时B组含量高于A组,差异显著(p<0.05);42d时,D组IgM含量低于B和C组,差异显著(p<0.05)。试验14d时,B、C和D组溶菌酶活性高于A组,差异极显著(p<0.01),同时D组活性低于B和C组,差异极显著(p<0.01);28d和42d时,B和C组溶菌酶活性高于A和D组,差异极显著(p<0.01),同时A和D组差异不显著。试验14d时,C和D组SOD活性低于A组,差异显著(p<0.05):28d时,D组SOD活性低于A、B和C组,差异极显著(p<0.01),同时B和C组高于A组,差异显著(p<0.05);42d时,D组SOD活性低于A、B和C组,差异极显著(p<0.01),同时B组活性高于A和C组,差异极显著(p<0.01),A和C组之间差异不显著。结果表明单独或同时添加枯草芽孢杆菌JS01和黄芪多糖可以提高建鲤血清相关免疫指针,增强免疫功能,且单独使用时效果更佳。5、RT-qPCR检测免疫基因相对表达量:试验42d时,B和C两组头肾IL-1β基因表达量高于A和D组,差异显著(p<0.05),A和D组间差异不显著;B、C和D三组头肾LZM-C基因表达量高于A组,差异显著(p<0.05),B组表达量高于C和D两组,差异显著(p<0.05),但C和D两组间差异不显著;A、B、C和D四组IL-8基因的表达量差异显著(p<0.05),B组表达量依次高于C、A和D组。结果表明单独或同时添加枯草芽孢杆菌JS01和黄芪多糖可以提高建鲤相关免疫基因的表达,增强免疫功能,且单独使用时效果更佳。结论:在饲粮中添加枯草芽孢杆菌JS01(2×107CFU/g)或APS (500mg/kg)可提高建鲤生长及免疫功能,在饲粮中同时添加枯草芽孢杆菌JS01(2×107CF/g)和APS (500mg/kg)也可以提高建鲤生长及免疫功能,但不如单独添加使用的效果。
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