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目的已有大量研究表明多种mi RNA,其中包括mi R-445-3p、mi R-331-3p等,通过参与胰腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、转移及耐药等多种恶性生物学行为从而介导胰腺癌的发生发展。mi RNA参与胰腺癌的恶性进程在体内外水平获得证实,然而仍然存在许多已知或未知的mi RNA可能单独或者协同参与其中。基于课题组前期研究工作,通过mi RNA微阵列芯片结果,筛选在胰腺癌（Pancreatic cancer,PC）病人手术切除的癌组织及胰腺癌细胞系中差异表达的mi RNA分子。确定mi R-324-5p为研究对象,探讨其对胰腺癌细胞增殖、抗凋亡能力的影响。方法1.本实验收集18对胰腺癌手术病人的癌组织及邻近癌旁组织标本;收集4种人胰腺癌细胞系（PANC-1、MIA Pa Ca-2、As PC-1、Bx PC-3）,1种正常胰腺导管上皮细胞系（HPDE6-C7）,利用q RT-PCR技术检测以上临床标本及细胞系中mi R-324-5p的相对表达水平。2.应用脂质体转染技术将mi R-324-5p inhibitor以及相应对照（mi R-324-5pinhibitor control）瞬时转染MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞,应用CCK-8细胞活力检测、Ed U细胞增殖成像、流式细胞术等实验方法检测抑制mi R-324-5p的表达后对MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞的增殖及抗凋亡能力的影响。3.利用q RT-PCR实验技术检测上述18对临床标本中KLF3基因m RNA的表达水平,同时利用q RT-PCR和Western blot实验技术检测在MIAPa Ca-2、Bx PC-3和HPDE6-C7细胞系中KLF3基因m RNA和蛋白的表达。构建KLF3过表达质粒（p CMV6-AC-KLF3）,通过细胞转染技术,将KLF3过表达质粒及相应空载（p CMV6-AC-Vector）瞬时转染MIAPa Ca-2和Bx PC-3细胞。应用CCK-8细胞活力检测、Ed U细胞增殖成像、流式细胞术等实验技术检测过表达KLF3后,对MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞的增殖及抗凋亡能力的影响。4.应用Target Scan、Mi RDB、Microrna.org等生物信息学软件预测mi R-324-5p的靶基因,筛选出KLF3作为潜在的靶基因。构建KLF3野生型及突变型质粒并用双荧光素酶报告基因实验验证mi R-324-5p与KLF3的靶向关系;利用q RT-PCR和Western blot技术检测,在MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞中过表达mi R-324-5p或抑制mi R-324-5p后KLF3基因m RNA和蛋白水平的改变。5.应用脂质体转染技术按分组将mi R-324-5p control、mi R-324-5p mimic、mi R-324-5p mimic+p CMV6-AC-KLF3共转体分别瞬时转入MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞,应用CCK-8细胞活力检测、Ed U细胞增殖成像、流式细胞术等实验技术检测共转染后对MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞的增殖、抗凋亡能力的影响;Western blot检测转染后细胞内PCNA、Bax以及Bcl-2相关蛋白的表达情况。结果1.与邻近癌旁组织相比较,mi R-324-5p在胰腺癌病人组织中的相对表达量显著升高,同时mi R-324-5p在PANC-1、MIA Pa Ca-2、As PC-1及Bx PC-3细胞系中的相对表达量明显高于HPDE6-C7细胞。2.mi R-324-5p inhibitor能抑制MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞的增殖,促进其凋亡。3.与邻近的癌旁组织相比较,KLF3在胰腺癌病人组织中m RNA的相对表达量显著降低,同时KLF3在MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞中m RNA和蛋白的相对表达量显著低于HPDE6-C7细胞;研究还发现过表达KLF3能抑制MIAPa Ca-2和Bx PC-3细胞的增殖,促进其凋亡能力。4.双荧光素酶报告基因实验证实KLF3是mi R-324-5p的下游靶基因;q RT-PCR和Western blot结果表明KLF3与mi R-324-5p的表达负相关。5.KLF3能部分逆转mi R-324-5p介导的MIA Pa Ca-2和Bx PC-3细胞增殖及抗凋亡作用。结论1.mi R-324-5p在胰腺癌组织及细胞系中的表达明显上调,同时mi R-324-5p抑制剂能够抑制胰腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡,提示mi R-324-5p在胰腺癌中可能作为新的促癌基因发挥功能。2.KLF3在胰腺癌组织及细胞系中的表达明显下调,过表达KLF3能够抑制胰腺癌细胞增殖、促进细胞凋亡,提示KLF3作为抑癌基因参与胰腺癌的发生发展。3.mi R-324-5p通过靶向抑制KLF3的表达从而影响胰腺癌细胞的增殖、抗凋亡能力。4.mi R-324-5p可作为诊断胰腺癌的非侵入性生物学标志物,同时还可能为胰腺癌的临床治疗提供新思路。