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目前,肺癌是全世界增长最快,发病率和死亡率最高的癌症,是对人类生命和健康威胁最大的恶性肿瘤。天然抗肿瘤药物的开发,特别是对来自于高等植物中的抗癌活性成份的研究,已成为抗癌药物研究的热点。鱼腥草(Houttuynia cordata Thunb,HCT)来源于三白草科蕺菜属植物蕺菜,具有良好的清热解毒,排脓消痈的功效。鱼腥草在民间用作肺痈要药,而肺痈的发生发展和肺癌有着密切的关系。生物碱为鱼腥草的主要有效组分之一,有文献报道鱼腥草生物碱(Houttuynia cordata Thunb alkaloids,HCT-A)据有较好的抗肿瘤作用,但关于其对肺癌的功效和作用机制鲜有报道。本课题研究HCT-A对肺癌细胞的作用,并初步阐述其作用机制,实验内容主要包括三个部分,分别为HCT-A的提取纯化、诱导肺癌细胞凋亡实验以及凋亡机制研究。第一,HCT-A的提取纯化。采用回流提取法进行提取,然后进行HCT-A纯化工艺的考察,以鱼腥草中的盐酸小檗碱、胡椒内酰胺和马兜铃内酰胺B作为考察指标,得出适宜的纯化工艺条件为:HCT-A的上样浓度为20 mg/ml,pH为3左右,最大上样量为40 ml,吸附流速为0.5 ml/min,静置吸附2小时,再用60 ml的纯化水冲洗杂质,洗脱溶剂为1%氨水乙醇(氨水浓度为0.5N,乙醇浓度为80%),洗脱剂用量为70ml,洗脱速度为3.0 ml/min。最后从4 kg鱼腥草干品中提取纯化得生物碱浸膏11.375g,得率为0.2759%。第二,HCT-A抑制肺癌细胞生长及诱导肺癌细胞凋亡实验。选择95D、A549、SPC-A-1、H1975、H460五种肺癌细胞为研究对象,首先用经典的MTS实验研究其对肺癌细胞的体外增殖作用,结果发现,HCT-A对肺癌细胞的体外增殖具有明显的抑制作用,随着剂量的增加,抑制效果增强,95D、A549、SPC-A-1、H1975、H460的IC50分别为29.51μg/ml、72.04μg/ml、67.94μg/ml、54.00μg/ml、130.17μg/ml。接着,分别设置0、1/2IC50、IC50、2IC50四个浓度值加药处理5种肺癌细胞,48h后观察其形态具有明显变化,细胞体积变小,萎缩,随着药物浓度逐渐增大,细胞进一步萎缩,部分细胞脱落,细胞数量减少,细胞折光性降低,固缩黑斑数量增多。为验证药物是否是通过诱导凋亡发挥上述作用,又设计了Hoechst 33258染色实验和Annexin V/PI双染实验,细胞经染色后,镜下观察加药后的细胞,会有一些大小不等呈亮蓝色的凋亡小体,呈致密浓染,流式细胞仪双染结果表明,加药处理过的肺癌细胞早期凋亡细胞比例具有不同程度的升高,差异具有统计学意义。第三部分,HCT-A抑制肺癌生长及诱导肺癌细胞凋亡机制的研究。本部分实验首先研究了HCT-A对肺癌细胞周期的影响,选取95D、A549和H460为研究对象,浓度设置为0、1/2IC50、IC50,实验结果表明,HCT-A可以将三种肺癌细胞的细胞周期阻滞在G0/G1期。接下来选取A549为研究对象,设置四组浓度0、40、70、140μg/ml,加药处理48h后,提取总蛋白,Western Blot结果表明,随着HCT-A剂量的增加,p53和Bax的表达量呈现升高趋势,Bcl-2表达量降低,Bax/Bcl-2比值升高,说明鱼腥草诱导肺癌细胞凋亡与p53基因、Bcl-2家族基因有关。最后,以A549细胞为研究对象,研究了Caspase级联反应中的Caspase-3/-8/-9在HCT-A诱导凋亡过程中的活性变化,实验结果表明,HCT-A可以明显增加Caspase-3/-9的活性,而Caspase-8的活性没有明显变化,说明HCT-A通过增加Caspase-3/-9的活性激活Caspase级联反应,诱导凋亡发生。本课题从多个方面系统的研究了HCT-A抗肺癌的作用,并对其诱导肺癌细胞凋亡的机制进行了研究,为寻找鱼腥草抗肺癌的有效组分以及新药开发提供理论基础。