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目的:初步阐述Bad在食管鳞癌细胞中对Dad1表达的调控作用,了解上调和下调Bad对食管鳞癌细胞周期和凋亡的影响。方法:(1)培养人食管鳞癌ECA109和KYSE450细胞,构建Bad过表达载体重组质粒GV142-Bad,转染食管鳞癌细胞组作为Bad高表达组,转染空载体的细胞组作为阴性对照组,完全培养基处理的细胞组作为空白对照组。转染24h后,荧光倒置显微镜观察细胞中绿色荧光蛋白的表达情况,提取总RNA和蛋白并使用qPCR及Western blot检测Bad在基因转录和蛋白水平的表达来验证转染效率。同时检测转染细胞中Dad1在基因转录和蛋白水平的表达。GV142-Bad载体转染48 h后,使用流式细胞仪检测上调Bad的表达对细胞周期和凋亡的影响。(2)人工合成针对人Bad基因的si RNA(si RNA-Bad),转染食管鳞癌ECA109和KYSE450细胞,作为Bad的低表达组,转染阴性对照si RNA(negative-si RNA)的细胞组为阴性对照组,完全培养基处理的细胞组作为空白对照组。转染24h后,提取总RNA和蛋白,使用qPCR以及Western blot检测Bad在基因转录水平和蛋白水平的表达,验证转染效率。同时检测Dad1在基因转录和蛋白水平的表达,验证下调Bad表达是否调控了Dad1的表达。si RNA-Bad转染48 h后,使用流式细胞仪检测下调Bad表达对细胞凋亡的影响。结果:(1)成功构建Bad过表达载体GV142-Bad,GV142-Bad过表达重组质粒转染食管鳞癌细胞ECA109和KYSE450后可以上调Bad在基因转录和蛋白水平的表达。同时检测到Dad1在基因转录和蛋白水平表达被下调。(2)成功合成针对人Bad基因的si RNA,转染食管鳞癌ECA109和KYSE450细胞后能够下调Bad在基因转录和蛋白水平的表达。同时检测到Dad1在基因转录和蛋白水平的表达被上调。(3)上调Bad基因的表达后观察到ECA109细胞周期G2/M期被延长,同时S期有缩短趋势,但统计结果差异不显著(P>0.05)。而KYSE450细胞周期阻滞于G2/M期并伴有S期缩短,差异有统计学意义(P<0.05)。上调Bad基因的表达后发现两种细胞的凋亡比率显著增加,差异有统计学意义(P<0.05)。下调Bad基因表达后两种细胞的凋亡率有下降趋势但不显著,三组之间差异无统计学意义(P<0.05)。结论:促凋亡基因Bad可能调控抗凋亡基因Dad1的表达,两者之间可能存在负调控关系,Bad基因可能通过将癌细胞周期阻滞于G2/M并且促进其凋亡来,抑制其增殖。