牛种布鲁氏菌2308株wbkA、pmm基因缺失株的构建及免疫效果的初步研究

来源 :石河子大学 | 被引量 : 6次 | 上传用户:hionor
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
布鲁氏菌病(Brucellosis,简称布病)是由革兰氏阴性菌布鲁氏菌引起的一类人兽共患的慢性传染病,目前在我国以及世界上大多数国家有比较广泛的流行。该病原菌可感染多种家畜及人,还可感染野生动物,近来还发现该病菌还可感染海洋动物。人类感染布鲁氏菌用抗生素治疗需要持续几个月但不是完全有效,对人类而言没有有效的疫苗,有几个许可的活疫苗可以在牲畜上使用,而这些动物疫苗的效果取决于宿主的种类、免疫剂量、免疫途径。目前世界各国对布病的防控都主要采用的是疫苗接种,然而又因现用疫苗都普遍存在毒力较强,可引起怀孕母畜的流产,甚至还可感染人等缺陷,同时使用了疫苗后难以区分自然感染和疫苗免疫,从而限制了疫苗的实际应用。因此,本研究拟通过缺失牛种布鲁氏菌2308的wbkA,pmm基因构建相应的缺失株,初步评价其毒力和免疫保护效果。同时表达了WBKA,PMM两个蛋白,开发出一种能有效区分自然感染和疫苗免疫的布鲁氏菌弱毒基因缺失株,旨在筛选具有潜在应用价值的疫苗候选株。本文所做的主要工作及成果如下:1.布鲁氏菌2308株wbkA和pmm基因缺失株的构建及鉴定:以牛种布鲁氏菌2308为模板高保真扩增wbkA和pmm基因上下游同源臂,以枯草芽孢杆菌为模板高保真扩增SacB基因,将得到的上下臂SacB与分别连接到pGEM-7zf+,构建pGEM-7zf-wbkA-SacB(pwS)和pGEM-7zf-pmm-SacB(ppS)。自杀载体pGEM-7Zf+上,分别构建成pGEM-7Zf+-ΔwbkA和pGEM-7zf+-Δpmm,制备牛种布鲁氏菌2308感受态,电转化重组质粒pwS和ppS,通过氨苄、蔗糖的两次筛选得获得ΔwbkA和Δpmm基因缺失株,进行遗传稳定性检测。2.ΔwbkA和Δpmm基因缺失株的毒力及免疫效果的初步评价:在小鼠巨噬细胞RAW264.7水平初步验证ΔwbkA和Δpmm的毒力;用缺失株免疫6周龄昆明白小鼠,通过CFU计数初步评价缺失株的毒力;通过常规血清学试验初步验证小鼠体内的抗体水平,采用间接ELISA方法检测小鼠体内总IgG水平以及细胞因子IFN-γ的水平;对用缺失株免疫30d后的小鼠进行攻毒试验评价其保护效果。3.构建原核表达载体pET-wbkA和pET-pmm及鉴别诊断:用PCR方法分别扩增wbkA和pmm基因,将测序正确的基因序列分别克隆到大肠杆菌表达载体pET-32a上,然后转化至大肠杆菌DE3(BL21)中诱导表达并纯化WBKA和PMM蛋白,再以纯化的WBKA和PMM蛋白作为抗原,与缺失株ΔwbkA和Δpmm免疫的小鼠血清进行Westernblot分析,鉴定血清中是否存在抗WBKA和PMM的抗体。本研究结果表明ΔwbkA和Δpmm缺失株具有一定的遗传稳定性,ΔwbkA和Δpmm缺失株的毒力较亲本株2308相比有一定程度的下降,且毒力与疫苗株S19差异不大。免疫原性试验结果显示同时ΔwbkA和Δpmm缺失株均能诱导机体产生一定的抗体。攻毒试验结果表明缺失株能保护小鼠免受2308强毒株的感染,保护力与疫苗株S19相比略低。WB结果显示ΔwbkA缺失株和Δpmm缺失株免疫的小鼠的血清中不能产生抗WBKA蛋白和PMM蛋白的抗体。
其他文献
细小病毒科中博卡病毒属成员具有特征性的第三个开放阅读框(Open Reading Frame, ORF),其中猪博卡病毒(Porcine bocaviruses, PBoVs)表现出最强的遗传多样性。基于衣壳蛋白(C
职工文化建设是我国社会主义文化建设的重要内容,职工文化是社会主义文化在企事业单位中的具体反映。加强职工文化建设,既是坚持党的群众路线、做好新时期职工工作的必然要求,又是建立和谐劳动关系、推动和谐社会建设的迫切需要。  党的十八大报告明确提出“扎实推进社会主义文化强国建设”这一战略目标,这不仅是对进一步深化改革的部署,更是对职工文化建设理论的创新与发展,为现阶段我国职工文化建设理论注入了新的科学内涵
摘 要: 新课改下初中英语教学的改革创新,一方面是满足新课程的要求,另一方面是为了更好地教育初中生。初中英语教学改革创新一定要慎重地、合理地、科学地进行,要符合英语教学改革创新的初衷,这样才会使初中英语教学改革创新变得有意义。本文以牛津译林版初中英语教学为例,就新课改下英语教学如何改革创新进行分析和研究。  关键词: 新课改 初中英语 教学改革 教学创新  在新课改背景下,传统的教学模式越来越不适
摘 要: 作为历史悠久、最负盛名的民营出版机构,商务印书馆一直在中国近代史上扮演着重要角色。本文从商务印书馆的创立和发展背景出发,探讨近代商务印书馆产生的深远影响和历史地位。文章将商务印书馆的发展史同福建近代史相结合,着重论述活跃于出版工作一线的福建人对商务印书馆的发展作出的卓越贡献,以及商务印书馆对福建教育的促进作用。希望通过这篇论文,将商务印书馆与福建的渊源作梳理。  关键词: 商务印书馆 福
摘 要: 翻译是语言转换活动,作为语言与语言之间的转换行为,它进行的是语言符号的转换,必须依据原语进行再创作,具有明显的综合性。科学性和艺术性的结合是翻译学的本质:忽视翻译的科学性是错误的,会导致失信的不良后果;忽视翻译的艺术性同样是错误的,会导致译作晦涩难懂,味同嚼蜡。  关键词: 翻译 科学性 艺术性  翻译是一种语言之间的转换活动,是把一种语言文字的意思用另一种语言文字表达出来,达到沟通思想
摘 要: 长期以来,由于受高考指挥棒影响,高中语文教学普遍采用应试教学方式,对学生的创新能力缺乏必要重视。虽然在当前教改背景下,从上到下都高举素质教育大旗,但是实际上成效一直不理想。高中语文教师如何有效地进行高中语文教学创新,是摆在当前广大高中语文教师面前的一项重要任务。作者结合多年高中语文一线教学实践经验,谈谈高中语文教学的创新。  关键词: 高中语文教学 教学法 创新研究  在新课改背景下,创
摘 要: 人的自由发展理论是马克思、恩格斯主义理论的一个重要理论组成部分。其实早在160多年前,马克思、恩格斯等无产阶级革命家就在《共产党宣言》中提出关于人的自由发展的理论,指出人类奋斗的终极目标是:“代替那存在着阶级和阶级对立的资产阶级旧社会的,将是这样一个联合体,在那里,每个人的自由发展是一切人的自由发展的条件”,这是马克思恩格斯对未来共产主义和谐社会的美好构想。我国在构建社会主义和谐社会的进