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目的急性白血病是最常见的血液系统恶性肿瘤,它是一组起源于造血干细胞的恶性克隆性疾病。联合化疗是目前治疗急性白血病的主要手段,但20%-30%的患者化疗后不能获得完全缓解,或缓解后很快复发,其根本原因是白血病细胞对化疗药物产生了多药耐药(multidurg resistance,MDR)。因此探索白血病治疗的新途径,提高白血病细胞对化疗药物的敏感性有重要的临床意义。核转录因子kappaB (nuclear transcription factoкB, NF-кB)是一种细胞凋’亡相关因子,NF-кB的活性失控与多种肿瘤的发生发展、浸润转移及多药耐药密切相关,某些抗癌药物在诱导肿瘤细胞凋亡的过程中可同时活化NF-кB,使肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药。多药耐药是多因素、多机制共同作用的结果,其中多药耐药基因mdr-1的高表达是研究最深入的机理之一,已有研究显示mdr-1表达的增加与NF-кB活性升高密切相关。抑制化疗诱导性NF-кB的活化达到逆转耐药的目的是提高肿瘤化疗敏感性的关键,开发和寻找NF-кB抑制剂是当前肿瘤治疗领域的一个热点。目前有研究发现柳氮磺吡啶(sulfasalazine SAS)能通过抑制NF-кB的抑制物(inhibitor of NF-кB, I-кB)的磷酸化降解而特异性地抑制NF-кB的激活。柳氮磺吡啶通过抑制NF-кB的激活而增强化疗敏感性的报道见于胰腺癌、肺癌、食管癌等,而该药应用于白血病的资料报道较少。本课题拟将SAS联合化疗药物吡柔比星(perarubicin,THP)作用于K562细胞后,检测对白血病细胞增殖和凋亡的影响及I-кB-α蛋白、NF-кB(P65)蛋白、mdr-1基因的表达的变化,探索SAS的化疗增敏效应及作用机制,以期为增强白血病临床治疗效果提供实验依据。方法1.应用水溶性四唑盐光吸收法(WST-1)检测THP(终浓度50μmol/L)单独和联合SAS(终浓度分别为0.1mmol/L、1mmol/L、10mmol/L、100mmol/L)作用K562细胞6h、12h、24h、48h后细胞的增殖情况,计算增殖抑制率,找出SAS的最适作用时间和浓度,并以此浓度和时间进行后续实验。2.应用流式细胞术(FCM)Annexin V-FITC/PI双标法检测THP单独和联合SAS作用K562细胞后细胞的凋亡率。3.应用Western-blotting法检测THP单独和联合SAS作用K562细胞后I-кB-α、NF-кB (P65)蛋白的表达。4.应用RT-PCR法检测THP单独和联合SAS作用K562细胞后mdr-1基因的表达。5.所得结果应用SPSS13.0统计学软件处理,计量资料统计学数据用均数±标准差(x±s)表示,两样本均数比较采用t检验,以α=0.05为检验水准。结果1.THP单独和联合不同浓度SAS对K562细胞增殖的抑制作用THP(终浓度50μmol/L)单独和联合SAS(终浓度分别为0.1mmol/L、1mmol/L 10mmol/L、100mmol/L)作用K562细胞后,在24h内,SAS浓度≤10mmol/L情况下,随着时间的延长,SAS浓度的增加,两者联合对细胞增殖的抑制作用呈逐渐增强的趋势(p<0.05),且联用抑制作用均强于单独应用THP(p<0.05)。THP联合不同浓度SAS作用于K562细胞后同一时间组两两比较,10mmol/L和100mmol/L之间差异无统计学意义(p>0.05)。THP联合同一浓度SAS作用于K562细胞后不同时间组两两比较,24h和48h之间之间差异无统计学意义(p>0.05)。因此,联用后SAS的最适作用浓度为10mmol/L,最适作用时间为24h。2.THP单独和联合SAS对K562细胞凋亡率的影响阴性对照组、THP组和联合组作用K562细胞24h后,凋亡率分别为：(0.37±0.02)%、(32.36±2.04)%、(45.65±2.15)%。三组数据两两比较差异有统计学意义(p<0.05)。3.THP单独和联合SAS对K562细胞I-кB-α、P65表达的影响阴性对照组、THP组和联合组作用K562细胞24h后,I-кB-α蛋白相对表达水平分别为：0.931±0.062、0.312±0.026、0.656±0.043,三组数据两两比较差异有统计学意义(p<0.05)；P65蛋白相对表达水平分别为：0.345±0.023、1.011±0.054、0.632±0.049,三组数据两两比较差异有统计学意义(p<0.05)4.THP单独和联合SAS对K562细胞mdr-1表达的影响阴性对照组、THP组和联合组作用K562细胞24h后,mdr-1基因相对表达水平分别为：0.062±0.007、0.156±0.011、0.096±0.008。三组数据两两比较差异有统计学意义(p<0.05)。结论1.SAS能增敏THP对K562细胞的化疗效应,且最适作用浓度是10mmol/L,最适作用时间是24h。2.SAS增敏THP对K562细胞的化疗效应可能与上调I-кB-α蛋白,下调P65蛋白、mdr-1基因表达有关。