孕激素、LY294002调节FOXO1表达对不同PR卵巢癌细胞增殖、凋亡的作用机制

来源 :遵义医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:liongliong478
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:探讨孕激素(Progesterone,P)及磷脂酰肌醇-3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)/蛋白激酶B(Protein kinase B,PKB/AKT)抑制剂LY294002单独及联合干预下调节FOXO1表达对不同孕激素受体(Progesterone receptor,PR)卵巢癌细胞增殖、凋亡的作用机制,为卵巢癌激素治疗及靶向治疗提供理论依据。方法:选取生长良好的卵巢癌细胞株HO-8910(PR高表达)、SKOV3(PR低表达)作为研究对象。1.CCK-8法分别检测不同浓度P(0、12.5、25、50、100μmol/L)及LY(0、5、10、20、40μmol/L)单独作用24h、48h、72h对两株细胞的增殖影响。2.取生长良好的两株细胞均分4组:对照组(0μmol/L)、实验组:P组(25μmol/L)、P+LY组(25+20μmol/L)、LY组(20μmol/L),对照组加入等量不含药物的培养液。干预24h行相关实验检测:(1)CCK-8法检测两株细胞的增殖情况;(2)倒置显微镜观察两株细胞生长形态改变;(3)Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测两株细胞的凋亡情况;(4)免疫印迹法(Western Blot)检测各组中p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256、FOXO1、PR-A、PR-B蛋白的表达情况。结果:1.CCK-8检测两株细胞增殖情况:(1)不同浓度P作用:除外12.5μmol/L的P作用24h,与对照组SKOV3细胞存活率相比无明显差异(P>0.05),其余各实验组与对照组及各实验组间细胞存活率相比均有差异(P<0.05)。12.5-100μmol/L的P对HO-8910细胞抑制增殖作用显著高于SKOV3细胞且细胞存活率呈剂量-效应与时间-效应依赖性降低。(2)不同浓度LY干预:除外5μmol/L的LY作用24h、48h对两株细胞抑制增殖能力无明显差异(P>0.05),其余各实验组与对照组及各实验组间细胞存活率相比均有差异(P<0.05)。5-40μmol/L的LY对HO-8910、SKOV3细胞抑制增殖作用相似且细胞存活率呈剂量-效应与时间-效应依赖性下降。(3)P(25μmol/L)及LY(20μmol/L)联合作用24h,HO-8910、SKOV3细胞存活率分别为45.95±1.70%、72.23±2.08%。与药物单独作用相比,均为P+LY组抑制增殖效果最显著(P<0.05),且对HO-8910细胞抑制增殖作用较SKOV3细胞明显。2.倒置显微镜观察两株细胞形态学改变:对照组HO-8910、SKOV3呈上皮样细胞生长,类圆形、梭形、铺路石样排列紧凑贴壁生长,细胞边界清晰。实验组HO-8910细胞间隙增大并可见细胞碎片,细胞粘附性变差,贴壁细胞减少,悬浮细胞增多,细胞呈长梭形不规则改变,且镜下P+LY组形态变化最显著;SKOV3细胞P组形态变化不显著,P+LY组与LY组细胞间隙增大,部分细胞呈多角形,界限不清有融合现象,未见明显漂浮细胞。3.两株细胞凋亡情况:(1)与对照组相比,各实验组凋亡率均增加(P<0.05);(2)与药物的单独作用相比,均为P+LY组凋亡率最高(P<0.05);(3)P组及P+LY组对HO-8910促凋亡作用较SKOV3显著增高,两者凋亡率相比(P<0.05);(4)LY组对两株细胞诱导凋亡作用相比,差异无统计学意义(P>0.05)。4.两株细胞Western Blot结果显示:(1)与对照组相比,各实验组p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256表达降低,FOXO1表达增加,且均为P+LY组p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256降低最显著,FOXO1增加最明显;(2)P组及P+LY组作用下,对HO-8910降低p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256,上调FOXO1能力较SKOV3显著,两者蛋白表达相比(P<0.05);(3)而LY组一定时间及浓度下,对两细胞株p-AKTSer473、p-FOXO1Ser256、FOXO1表达无显著差异(P>0.05);(4)虽然药物干预后与对照组PR-B、PR-A表达相比无明显差异(P>0.05),但两细胞株间PR-B、PR-A表达相比(P<0.05),对两细胞株PR-B/PR-A比值进一步分析,显示HO-8910细胞PR-B在PR中所占比例较SKOV3细胞增加显著(P<0.05)。结论:1.孕激素可能主要通过PR-B介导下调PI3K/AKT活性,促进FOXO1的表达,从而影响HO-8910、SKOV3卵巢癌细胞的增殖、凋亡。2.LY294002对抑制PI3K/AKT活化,其上调FOXO1的作用机制可能与PR表达水平无关。3.孕激素及LY294002联合应用对卵巢癌HO-8910、SKOV3细胞抑制增殖、诱导凋亡具有协同作用。
其他文献
分析马克思主义的唯物史观存在着强唯物史观与弱唯物史观之别,但无论哪种唯物史观都认为"方向性"理念是唯物主义历史理论的基本前提。分析马克思主义者运用生物科学方法重释历
信用卡业务的飞速发展及其持有人规模的不断扩大,使信用卡作为支付工具在社会公众日常消费生活中发挥了重要作用。随着信用卡业务的发展壮大,持卡人与银行、特约商户等当事人
随着时代的发展,符号图像化的肢体语言在交际中的应用越来越广泛,在很大程度上辅助、补充和加强言语语言,尤其在公共交流中,它可以帮助说话者给他的听众留下很好的印象。本文
目的 :研究中药复方地甘口服液对白细胞共同抗原 (CD4 5)及免疫功能的影响。方法 :选用昆明种小鼠为实验对象 ,用环磷酰胺 (CTX)腹腔注射造成白细胞减少及免疫功能抑制模型 ,
原发性肝癌是高度恶性并严重危害人类健康的疾病,但其发病机制仍不十分清楚。虽然现在有很多的方法用于治疗原发性肝癌,如化疗、放疗、外科手术、生物治疗等,但是都不能明显
目的:分析慢性乙型肝炎(慢乙肝)肝硬化失代偿期及其并发甲状腺功能功减退(甲减)患者的临床特点及临床易漏诊、漏治的原因。方法:2005年5月—2010年10月在江苏省建湖县第三人
小区域流通货币是一种代用货币或货币符号。其发行主体或为钱铺、钱庄、商号、工矿企业等商业部门,或为县级地方基层政权,或为社会团体等准权力部门;其流通范围一般限于一县
在消除全球严重贫困之外,全球平等主义还主张限制全球过大的相对不平等。这种激进立场备受争议。一些国内平等主义者认为,全球平等主义者将国家视为一种完全的道德任意性,忽
以红肉枇杷为实验原料,对枇杷醋醋酸的发酵工艺进行优化并对醋酸味品质进行分析。通过单因素设计实验,研究发酵pH、发酵温度、醋酸菌接种量以及初始乙醇含量对醋酸味品质的影
目的:对学龄前反复呼吸道感染患儿进行中医体质分型,并对其进行外周血微量元素测定,探讨学龄前反复呼吸道感染患儿中医体质证型与其外周血微量元素之间的相关性。研究方法:对