肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma，HCC)在全世界最常见肿瘤中排第五位，其发病率不断上升，起病隐匿，且恶性程度高，预后极差。手术切除和肝移植是治疗肝细胞癌主要的治愈性方法，但是只适用于约15%的患者。大多数患者因肝癌已发生肝内或肝外转移失去手术机会。即使手术后也由于复发率高严重影响手术治疗效果。而转移和复发均为肝癌细胞侵袭转移作用所致，因此侵袭转移是制约肝癌治疗效果的关键。鉴于肝癌的这种生物学特性，对于肝癌的控制需要有效的药物治疗，然而现有的药物疗效无法令人满意。近年来，随着对抗肿瘤药物的研制和开发，研究者发现斑蝥素及其衍生物对于多种恶性肿瘤具有抑制作用，其抗肿瘤作用机制是多方面的，是一类广谱抗肿瘤药物。斑蝥酸钠维生素B6是斑蝥素的活性成分，多用于肝癌、胃癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、鼻咽癌和膀胱癌等中晚期恶性肿瘤的治疗。本药除了具有较强的抗肿瘤作用，同时还能够增强患者的免疫力。研究表明斑蝥酸钠维生素B6可抑制肝癌细胞增殖并促进细胞凋亡，而在对肝癌细胞侵袭转移特性的影响尚缺乏相应的研究。有研究表明Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路在肝癌的转移中发挥重要作用，而抑制ERK1/2和MEK1磷酸化可以对肝癌的转移发挥抑制作用。本实验拟研究斑蝥酸钠维生素B6对肝癌细胞侵袭力的影响，并探讨其机制与Ras/Raf/MEK/ERK信号传导通路是否有关。目的：研究斑蝥酸钠维生素B6对人肝癌细胞SMMC-7721侵袭力的影响，并探讨其作用机制是否与Ras/Raf/MEK/ERK通路有关。方法：体外培养人肝癌细胞株(SMMC-7721)；用不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6(0.25、0.5、0.75、1.0、1.5、2.0μmol/L)作用于SMMC-7721细胞24h、48h和72h后，MTT法检测细胞的增殖；用不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6(0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L)作用于SMMC-7721细胞24h、48h和72h后，通过Transwell侵袭实验检测细胞侵袭力的变化；Western-Blot方法测定不同浓度的斑蝥酸钠维生素B6(0.5、1.0、1.5、2.0μmol/L)分别作用于SMMC-7721细胞24h、48h后，细胞中ERK1/2和p-ERK1/2蛋白表达的变化。结果：MTT结果显示，斑蝥酸钠维生素B6作用于人肝癌SMMC-7721细胞24h时，各实验组与对照组均存在统计学差异(P＜0.05)，其增殖抑制率按药物浓度由低至高分别为4.93%、5.86%、13.9%、14.38%、20.14%、31.16%，其中组间比较除0.25μmol/L与0.5μmol/L、0.75μmol/L与1.0μmol/L之间无差异外，其余组间均存在统计学差异(P＜0.05)；药物作用为48h时，各实验组除0.25μmol/L与对照组之间无差异外均存在统计学差异(P＜0.05)，其增殖抑制率分别为1.58%、14.8%、23.88%、25.93%、35.15%、49.05%，各实验组间比较除0.75μmol/L与1.0μmol/L之间无差异外，其余组间均存在统计学差异(P＜0.05)；药物作用为72h时，各实验组与对照组均存在统计学差异(P＜0.05)，其增殖抑制率分别为12.5%、14.58%、14.6%、16.92%、18.42%、27.11%，其中2.0μmol/L与其余各实验组比较存在差异(P＜0.05)，其余组间比较差异均无统计学意义。Transwell侵袭实验结果显示，斑蝥酸钠维生素B6作用于SMMC-7721细胞24h，0.5μmol/L、1.0μmol/L、1.5μmol/L、2.0μmol/L实验组与对照组侵袭细胞数比较均存在统计学差异(P＜0.05)，各实验组侵袭抑制率按斑蝥酸钠维生素B6浓度从低到高分别为21.73%、31.14%、34.61%、46.44%，其中0.5μmol/L与2.0μmol/L实验组间侵袭细胞数存在显著性差异(P＜0.05)；药物作用为48h时，各实验组与对照组侵袭细胞数比较均存在统计学差异(P＜0.05)，侵袭抑制率分别为26.68%、36.19%、42.24%、53.13%，其中0.5μmol/L与2.0μmol/L实验组间侵袭细胞数存在显著性差异(P＜0.05)；药物作用为72h，0.5μmol/L、1.0μmol/L实验组与对照组侵袭细胞数比较无明显差异，而1.5μmol/L、2.0μmol/L实验组与对照组侵袭细胞数存在显著差异(P＜0.05)，但1.5μmol/L与2.0μmol/L组间未表现出统计学差异，其侵袭抑制率分别为14.56%、18.34%、31.48%、40.01%。Western blot方法检测ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达，结果显示：ERK1/2蛋白光密度值比(目标条带/β-actin)在实验组与对照组中均未表现出明显差异。p-ERK1/2蛋白的光密度值比(目标条带/β-actin)在24h各实验组按斑蝥酸钠维生素B6浓度从低到高分别为0.925±0.038、0.941±0.02、0.7±0.017、0.565±0.031，对照组为1.185±0.146，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义(P＜0.05)，实验组组间两两比较，除0.5μmol/L与1.0μmol/L组间无差异外，其余组间两两比较均有统计学差异(P＜0.05)；48h各实验组p-ERK光密度值比分别为1.558±0.155、1.555±0.094、1.397±0.014、0.796±0.019，对照组为2.109±0.1，各实验组与对照组比较差异存在统计学意义(P＜0.05)，其中0.5μmol/L、1.0μmol/L、1.5μmol/L实验组间无统计学差异，2.0μmol/L实验组与其余组间比较均存在差异(P＜0.05)。结论：斑蝥酸钠维生素B6能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖，且呈浓度依赖性(P＜0.05)。斑蝥酸钠维生素B6能够抑制人肝癌细胞SMMC-7721的侵袭力，呈浓度依赖性(P＜0.05)。在斑蝥酸钠维生素B6浓度为2μmol/L作用48h时抑制效果最强。斑蝥酸钠维生素B6作用于人肝癌SMMC-7721细胞后，可显著抑制p-ERK1/2蛋白的表达，且下调的程度与药物剂量相关(P＜0.05)。而对ERK1/2蛋白的表达无明显影响。说明斑蝥酸钠维生素B6可抑制ERK1/2蛋白磷酸化，从而对人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和侵袭转移发挥抑制作用。