蛋白转导(Protein transduction)是近年来生命科学领域的一项具有重要理论意义和潜在应用价值的新发现。具有蛋白转导特性的蛋白能够直接作用于脂质双层，以一种不依赖于受体和其它转运蛋白的非经典途径高效穿过生物膜进入细胞，并能在细胞间自主高效地传递。蛋白转导相关蛋白独特的转导能力不仅彻底打破了传统的基因转移模式，而且为增强人类基因治疗的效果、提高新型疫苗的免疫效力提供了新的途径，并成为近年来研究的热点之一。 继人单纯疱疹病毒(HSV-1)的VP22蛋白被证实具有蛋白转导特性之后，牛疱疹病毒Ⅰ型(BHV-1)、马立克氏病毒Ⅰ型(MDV-1)以及伪狂犬病毒(PRV)的VP22蛋白也相继被确定具有蛋白转导特性，但这4种VP22的蛋白转导能力存在差异，相比较而言，BHV-1 VP22(BVP22)和PRVVP22(PVP22)的蛋白转导能力明显强于HSV-1 VP22(HVP22)和MDV-1 VP22(MVP22)。而且本实验室的研究还发现，PVP22在转染细胞中有多种亚细胞定位形式。这些具有蛋白转导功能但转导能力不同蛋白的发现和深入研究，为了解VP22蛋白结构与功能之间的关系、探讨VP22蛋白转导的发生机制提供了新的契机，为设计和开发转导能力更强的新蛋白提供了新材料。 本课题以PVP22这种新发现的、并且转导能力更强的蛋白转导相关蛋白作为研究对象，通过构建不同区段缺失的突变体，分析了这些突变体的亚细胞定位，比较了各个突变体的转导特性、转导能力的差异，并探讨了这些突变体对DNA疫苗的免疫增强作用与其转导特性之间的关系，为深入了解PVP22的蛋白转导特性和可能的作用机制奠定了基础，具体研究内容如下： 1．通过PCR扩增的方法，获得了伪狂犬病毒VP22的7个C-端缺失突变体：Pmut1(1-30aa)、Pmut2(1-60aa)、Pmut3(1-90aa)、Pmut4(1-111aa)、Pmut5(1-159aa)、Pmut6(1-187aa)、Pmut7(1-241aa)，7个N-端缺失突变体：Pmut8(31-247aa)、Pmut9(61-247aa)、Pmut10(91-247aa)、Pmutll(112-247aa)、PmutB(149-247aa)、Pmutl2(160-247aa)、Pmut16(188-247aa)和八个C-端、N-端同时缺失的突变体：Pmut13(61-148aa)、Pmut14(188-241aa)、Pmut15(160-241aa)、Pmut17(149-187aa)、Pmut18(149-223aa)、Pmut19(149-213aa)、Pmut20(112-187aa)、Pmut83(149-231aa)，并且分别构建了这些缺失突变体与增强型绿荧光蛋白mut4EGFP融合表达的真核表达质粒。 2．将上述22个PVP22突变体与增强型绿色荧光蛋白mut4EGFP融合表达的真核表达质粒分别转染Hela细胞，通过荧光显微镜直接观察细胞内的绿色荧光分布，并与野生型PVP22(1-247aa)进行比较，初步确定了与PVP22亚细胞定位有关的结构域：1-30aa、60-90aa、112-149aa、187-247aa这4个片断均与PVP22核定位功能有关；1-30aa、187-241aa与PVP22微管定位功能有关；与细胞核内的颗粒样定位形式有关的区域在第111-159个氨基酸之间，并且第1-30个氨基酸对这种定位形式有着增强作用；发现