论文部分内容阅读
研究目的炎症细胞及其因子构成的子宫内炎性微环境是子宫内膜容受性概念的重要组成部分。本实验观察补肾活血方导法对肾虚血瘀着床障碍模型大鼠着床窗期子宫内膜形态学、血清雌二醇(Estrogen-2,E2)和孕酮(Progesterone,P)含量、子宫组织炎症介质脂氧素A4(lipoxin A4,LXA4)、促炎因子白细胞介素1α(Interleukin-1α,IL-1α)、白细胞介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素18(Interleukin-18,IL-18)和抗炎因子白细胞介素4(Interleukin–4,IL-4)、转化生长因子-β(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)、白血病抑制因子(Leukemia Inhibitory Factor,LIF)表达水平的影响,初步研究补肾活血方导法通过调控着床窗期子宫炎性微环境、胚胎-内膜交互对话而改善子宫内膜容受性的作用机制。研究方法将36只SPF级雌性成年SD大鼠进行阴道涂片,筛选出处于动情前期的雌性大鼠,称重编号,结合动物编号及随机数字表,将筛选出的雌鼠随机分入模型组、空白组、药低组、药高组、中对组、西对组6组,每组6只。除空白组外,其余各组以羟基脲联合肾上腺素建立肾虚血瘀证模,造模同时每天给与对应组别的干预药物10天。第11天开始,用阴道涂片观察法筛选出动情期雌鼠,按雌雄大鼠2:1的比例进行合笼,次日若观察阴道涂片发现精虫则视为合笼成功,记作妊娠第1天。于妊娠第4天(等同于着床窗期)皮下注射米非司酮,第5天抽取腹主动脉血液制备血清标本,剖取双侧子宫,取同侧适量子宫称重后制作组织匀浆,余下子宫置于甲醛溶液(10%)中固定制作病理切片分别HE染色和免疫组化检测使用。光镜下观察各组大鼠着床窗期子宫内膜形态学的改变;光镜下观察各组大鼠着床窗期子宫组织TGF-β表达的分布差异性;采用ELISA测定子宫组织LXA4、IL-1α、IL-1β、IL-18、IL-4、TGF-β、LIF的表达水平;采用ELISA测定血清甾体激素E2、P的含量。本实验数据运用IBM SPSS 25.0统计软件处理,结果以均数±标准差(±s)表示。研究结果1.补肾活血导法对各组大鼠着床窗期血清E2、P表达影响E2表达:与空白组比,模型组大鼠妊娠着床窗期血清E2水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,药高组、中药对照组大鼠妊娠着床窗期血清E2水平明显升高,差异有显著统计学意义(P<0.001)。P表达:与空白组比较,模型组大鼠妊娠着床窗期血清P水平明显降低,差异有显著统计学意义(P<0.001);与模型组比较,药高组、中药对照组大鼠着床窗期血清P水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)2.补肾活血方导法对各组大鼠着床窗期子宫形态学的影响模型组子宫内膜被覆上皮菲薄,上皮细胞数少,间质较密,腺体及螺旋小动脉偏少;空白组子宫内膜被覆上皮较厚,上皮细胞数目多且可见核下空泡,间质疏松均匀,腺体可见且规则,螺旋小动脉较丰富;药低、高组被覆上皮较模型组有程度不一的增长,上皮细胞数目较多(药高可见核下空泡),间质较疏松、均匀不一,腺体较多,螺旋小动脉较多;中对、西对组总体情况介于药低、药高组之间。3.补肾活血导法对各组大鼠着床窗起子宫组织TGF-β表达水平的影响TGF-β蛋白表达于大鼠子宫内膜被覆上皮、间质、腺体细胞胞质内,阳性特征为黄色颗粒。空白组可见黄褐色颗粒,密度较高,总覆盖面积广;模型组可见淡黄色稀疏颗粒,面积小;其余四组在颜色、密度和面积上的表现介于空白和模型之间。4.补肾活血方导法对各组着床窗期子宫组织抗炎介质LXA4表达量的影响与模型组相比,空白组、药低组、药高组、中对组、西对组LXA4的表达有明显降低(P<0.001);与空白组相比,药低组、中对组、西对组LXA4的表达增加(P<0.05);与药高组相比,中对组、西对组LXA4的表达升高(P<0.05)。5.补肾活血方导法对各组鼠着床窗期子宫组织IL-1α、IL-1β、IL-18表达量的影响IL-1α表达:空白组、药低组、药高组IL-1α的表达量,与模型组相比均有增加(P<0.05);其余各组两两比较之间均未发现统计学意义的差异性表达。IL-1β表达:空白组、药低组、药高组IL-1β表达量,与模型组相比均有减少(P<0.05);与药高组比较,西对组IL-1β的表达量升高(P<0.05)。其余各组两两比较之间均未发现差异有统计学意义。IL-18表达:空白组、药高组、西药组IL-18表达量,与模型组相比有增加(P<0.05)。6.补肾活血方导法对各组大鼠着床窗期子宫组织IL-4、TGF-β、LIF表达量的影响IL-4表达:空白、中对二组中IL-4的表达量较模型组均有转高(P<0.05);药高组中IL-4的平均表达量较模型组有增加,差异性显著(P<0.001);模型、药低、中对、西对四组中的IL-4的平均表达量较药高组有降低(P<0.05)。TGF-β表达:空白、药高、中对三组中TGF-β的表达量均较模型组增加(P<0.05)。LIF表达:空白组、药高组、中对组的LIF表达量,与模型组相比有增加(P<0.05)。7.补肾活血方导法对各组大鼠着床窗期促炎/抗炎因子平衡的影响促炎因子/IL-4比值:空白、药低、药高、中对、西对5组的IL-1β/IL-4比值与模型组比较时差异有统计学意义(P<0.05)。促炎因子/TGF-β:模型和药高两组间比较IL-1α/TGF-β比值时,差异有统计学意义(P<0.05);空白、药低、药高、中对四组的IL-1β/TGF-β比值较之于模型时,差异有统计学意义(P<0.05)。促炎因子/LIF:模型和药高两组间比较IL-1α/LIF比值时,差异有统计学意义(P<0.05);空白、药低、药高、中对四组的IL-1β/LIF比值较之于模型时,差异统计学意义(P<0.05)。研究结论1.补肾活血方通过上调肾虚血瘀着床障碍模型大鼠着床窗期甾体激素雌二醇、孕酮的表达,改善子宫内膜容受性,从而帮助胚胎着床;2.补肾活血导法可能通过上调雌二醇E2和孕酮P表达而改善肾虚血瘀着床障碍模型大鼠着床窗期子宫内炎性微环境的平衡,有利于子宫内膜容受性和母-胚交流对话机制建立,从而使胚胎植入顺利进行。