研究背景与目的：　　多发性硬化（Multiple Sclerosis,MS）是一种中枢神经系统（central nervous system,CNS）感染性炎性脱髓鞘性自身免疫性疾病，该病多见于年轻患者，病理特征以 CNS内广泛的血管周围炎性细胞浸润、血脑屏障（blood-brain barrier， BBB）破坏及白质髓鞘脱失为主，且病变有复发-缓解过程。实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)是由神经髓鞘抗原诱导、以特异性致敏的CD4+T细胞介导为主的CNS自身免疫性动物模型，是国内外研究MS免疫致病机制及指导临床用药治疗的理想动物模型。目前，MS的具体病因、发病机制仍不十分清楚，而MS及EAE的一个重要特征是：在CNS脑实质的炎性病灶处聚集着大量非特异性白细胞，可识别髓鞘抗原，EAE临床症状的出现与这些促炎细胞进入CNS同时发生。　　近年来，随着对疾病认识的进一步加深，研究发现趋化因子及其受体参与了MS致病过程的各个方面，人们通过认识趋化因子及其受体在MS中的作用，为研究MS发病机制、寻求新的治疗靶点提供了良好的前景。Eotaxin是一种嗜酸性粒细胞（EOS）选择性趋化和激活因子，与CCR3受体特异性结合，在趋化、激活和募集嗜酸性粒细胞方面作用显著，在目前已知的EOS趋化剂中，其选择性最高、作用强度最大。血脑屏障（blood-brain barrier，BBB）的第一道屏障是由脑微血管内皮细胞及其紧密连接所组成，紧密连接及其相关蛋白的改变可能导致BBB通透性的变化，紧密连接蛋白-5（Claudin-5）作为BBB的重要组成部分，其蛋白水平的变化可以反映 BBB是否发生破坏，是监测 BBB完整性较为特异的指标。　　本研究通过检测实验性自身免疫性脑脊髓炎（EAE）大鼠发病初期、急性期、缓解期血清中和脑组织中CCL26的浓度、脑组织中CCR3、Claudin-5的蛋白表达，探讨其与EAE严重程度的相关性及其可能存在的作用机制，为MS的治疗提供理论基础。　　方法：　　1.EAE大鼠模型的建立：　　将60只体重180~220g，6~8周龄的清洁级雌性 Wistar大鼠随机分为2组：正常组、EAE组，每组30只。EAE组又分为发病初期组（免疫后第11天）、急性期组（免疫后第18天）、缓解期组（免疫后第24天），每组10只。EAE实验大鼠模型的建立：在无菌环境下，制备新鲜的豚鼠全脊髓匀浆（guinea pig spinal cord homogenate，GPSCH），将其按照1:1的体积比与含6mg/ml卡介苗（Bacillus Calmette-Guérin，BCG）的完全弗氏佐剂（complete freund adjuvant，CFA）混合均匀，随后在冰浴条件下反复抽打至少1h，制备成稳定的油包水型抗原乳剂，将实验大鼠麻醉，分四点将其注射到大鼠四肢足垫皮下，每只大鼠0.5ml抗原乳剂，诱导建立EAE模型。　　2.动物标本采集：　　自免疫当天起，详细观察并记录wistar大鼠的行为特征、活动状态、饮食精神状况、体重变化以及神经功能学评分。分别于EAE大鼠发病后第11天（发病初期）、第18天（急性期）、第24天（缓解期）用10%水合氯醛将其麻醉，随后心尖采血，离心后留取上层血清置于-80℃冰箱保存备用；用预冷的生理盐水对大鼠心脏进行快速灌注，在无菌条件下留取实验大鼠脑组织和脊髓，并迅速投入液氮中备用，脑组织和脊髓腰膨大部位制作成石蜡切片。　　3.相关指标检测：　　苏木精-伊红( HE)染色检测脑组织中炎性细胞浸润情况，酶联免疫吸附法（ELISA法）检测血清中和脑组织中CCL26的浓度、免疫组织化学法检测脑组织中CCR3的蛋白表达、免疫荧光化学法检测脑组织中Claudin-5的蛋白表达。采用spss17.0软件对所得数据进行统计学分析。　　结果：　　1.体重变化情况：自免疫第二天起，正常组大鼠体重呈现稳步增长的趋势， EAE组大鼠呈现先上升后下降的趋势。　　2.神经功能学评分：正常组大鼠未出现神经功能缺损改变，评分一直保持为0；EAE组大鼠的神经功能学评分显著高于正常组（p＜0.01），且自免疫后第11天起，急性期组与发病初期组、缓解期组大鼠神经功能学评分出现显著差异（p<0.05）。　　3.组织病理学变化：正常组大鼠在其脑组织内未检测到有炎性细胞浸润；EAE组大鼠炎症浸润情况较正常组严重（p<0.01），急性期组大鼠炎症评分显著高于发病初期组（p<0.05）、缓解期组（p<0.05）。　　4.脑组织中Claudin-5的荧光强度表达：与正常组相比，EAE组大鼠脑组织Claudin-5荧光强度显著降低，差异具有统计学意义（P＜0.01）；与发病初期组、缓解期组相比，急性期组大鼠脑组织Claudin-5荧光强度显著降低（p＜0.05）。　　5.血清中CCL26的浓度：与正常组相比，EAE组血清CCL26水平显著升高，差异具有统计学意义（p＜0.01）；与发病初期组、缓解期组相比，急性期血清CCL26水平显著升高（p＜0.05）。　　6.脑组织中CCR3的阳性细胞表达量：与正常组相比，EAE组脑组织中CCR3的蛋白表达显著升高，差异具有统计学意义（p＜0.01）；与发病初期组、缓解期组相比，急性期脑组织中CCR3蛋白表达显著升高（p＜0.05）。　　7.脑组织中CCL26的浓度：与正常组相比，EAE组脑组织中CCL26水平显著升高，差异具有统计学意义（p＜0.01）；与发病初期组、缓解期组相比，急性期脑组织中CCL26水平显著升高（p＜0.05）。　　8.EAE组大鼠血清中和脑组织中CCL26水平及脑组织CCR3+细胞数与炎症评分均呈正相关，而与 Claudin-5蛋白含量呈负相关。　　9.EAE组大鼠血清中CCL26水平与脑组织中CCL26水平呈正相关。　　10.EAE组大鼠Claudin-5蛋白含量与炎症评分呈负相关。　　结论：　　1. CCL26及 CCR3在 EAE组大鼠急性期表达明显增高，提示 CCL26及CCR3可能参与EAE大鼠的致病过程。　　2. CCL26及 CCR3与 EAE组大鼠炎症评分均呈正相关，提示 CCL26及CCR3可能与疾病的严重程度相关，其表达量越高，疾病越重。　　3. CCL26及 CCR3与 Claudin-5蛋白表达水平呈负相关，提示 CCL26及CCR3可能是通过受损的血脑屏障进入到脑组织进而引起炎症反应。　　4. EAE组大鼠发病过程中有血脑屏障破坏，其炎症评分与血脑屏障破坏的严重程度相关。