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免疫磁珠技术是近年来国内外研究的一种新的免疫学技术,由于具有高特异性、高浓缩性、高分离率,且不影响细胞活性等特点,与常规检测技术(如RT-PCR、流式细胞仪等)相结合,弥补了常规检测技术的不足,改善了这些检测方法对肿瘤细胞检测的敏感性及特异性。免疫磁珠分离在循环肿瘤细胞检测中的应用价值已得到了肯定,但其用于乳腺癌前哨淋巴结活检(SLNB)术中诊断国内外尚未见报道。本课题应用免疫磁珠分离技术对早期乳腺癌患者前哨淋巴结活检所得到的前哨淋巴结(SLN)行术中诊断,与传统的术中冰冻HE染色及细胞角蛋白免疫组化(CK-IHC)法相比,评价其敏感性、特异性、假阴性率等指标,旨在建立一个新的分子学诊断模型,为当前乳腺癌前哨淋巴结转移的术中诊断方法提供新的思路。2009年1月至2009年9月天津市肿瘤医院连续收治的62例女性乳腺癌病人。所有病人均符合2009年NCCN推荐的前哨淋巴结活检的条件,于术中以美蓝法行前哨淋巴结活检术。每个病人所得的SLN标记后,将每个前哨淋巴结平均分为A、B、C、D四部分。将对角线的A、D部分行moc-31单抗免疫磁珠分离联合流式细胞分析乳腺癌转移相关标志物CD44v6、her-2、Mucin-1表达水平,从而诊断SLN的转移情况。而同一淋巴结的B、D两部分各取两张切片行传统的前哨淋巴结术中冰冻HE染色和抗CK7及CKAE1/AE3细胞角蛋白免疫组化技术(CK-IHC)诊断SLN的转移情况。比较三种术中诊断方法对前哨淋巴结活检的敏感性、特异性、假阴性率等指标,并进行统计学分析。1.前哨淋巴结检出情况：我们成功确定了62例中52例的SLN,成功率83.9%。52例确定SLN的病例,共检出SLN 89枚。在52例成功实施SLNB的病人均行全腋窝淋巴结清扫术,共检出腋窝非SLN 914枚,每例9-51枚,平均为17.6枚,中位淋巴结数18枚。其中25例病人腋窝淋巴结有转移,共取得阳性淋巴结120枚。2.乳腺癌前哨淋巴结的HE染色：89枚SLN冰冻切片发现17例病人24枚SLN发生转移。在25例腋窝淋巴结阳性病人中,术中SLN冰冻切片组8例病人SLN阴性,而伴非SLN的淋巴结转移,假阴性率为32%(8/25)。SLN术中冰冻HE染色的敏感性为68%(17/25),特异性为100%(17/17)。3.抗CK7和CKAE1/AE3细胞角蛋白免疫组化：52例病人取得的89枚SLN中通过抗CK7和CKAE1/AE3细胞角蛋白免疫组化,其中19例病人28枚SLN诊断为转移。运用细胞角蛋白免疫组化染色诊断乳腺癌前哨淋巴结转移敏感性为76.0%(19/25),特异性为100.0%(19/19),假阴性率为24%(6/25)。4.免疫磁珠分离诊断前哨淋巴结转移：联合免疫磁珠分离与流式细胞分析,发现24例病人39枚SLN发生转移。在免疫磁珠分离组,1例SLN阴性,而伴非SLN得淋巴结转移,假阴性率为4.0%(1/25)。免疫磁珠分离法用于SLNB的敏感性为96%(24/25),特异性为96.3%(26/27)。1.本实验引入免疫磁性分离技术术中诊断前哨淋巴结转移,与传统的冰冻HE染色及CK-IHC相比,证实免疫磁珠分离能够快速、准确地判断出SLN阳性细胞,为下一步指导手术奠定了坚实的基础。2.我们对乳腺癌前哨淋巴结行传统的冰冻HE染色发现,在前哨淋巴结的术中诊断方面,传统的冰冻HE染色在临床上广泛应用的同时却仍有敏感性低,假阴性率较高等不足。3.本实验对乳腺癌前哨淋巴结行抗CK7和CKAE1/AE3细胞角蛋白免疫组化染色,其敏感性及假阴性率等指标较冰冻切片HE染色法具有明显的优势。在冰冻HE染色的基础上联合CK-IHC分析可以有效的提高SLN检测的灵敏度及微转移的检出率,但由于CK-IHC时间较长,故实用性较差。4.免疫磁珠分离技术较冰冻切片和细胞角蛋白免疫组化技术在乳腺癌前哨淋巴结活检中,在敏感性和假阴性率等指标上具有明显的优势,其结果的稳定性有待更大样本的验证。5.乳腺癌前哨淋巴结中CD44v6、her-2、mucin-1等标志物的表达与患者原发肿瘤三种标志物的表达情况呈正相关,提示前哨淋巴结中恶性细胞与原发瘤中恶性细胞的同源性。CD44v6、her-2、mucin-1有望成为评价乳腺癌患者腋窝淋巴结转移情况的新指标。