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研究目的:(1)观察硼替佐米(Bortezomib,BTZ)、高三尖杉酯碱(Homoharringonine,HHT)两者单药及联合对K562细胞增殖和凋亡的影响。(2)探讨硼替佐米及高三尖杉酯碱对K562细胞的联合作用机制与Bcl-2、Bax、Mcl-1蛋白表达量的关系。研究方法:将K562细胞株按不同处理分为4组:(1)BTZ(20nmol/L)组(2)HHT(40ng/m L)组(3)BTZ(20nmol/L)+HHT(40ng/m L)联合组(4)对照组。1、采用MTT方法检测各处理组中K562细胞增殖抑制率的变化。2、采用Annexin V-FITC/PI双染色法检测各处理组中K562细胞早期凋亡率的变化。3、采用Western Blot方法测定各处理组中Bcl-2、Bax及Mcl-1蛋白相对表达量的变化。实验结果:1、在BTZ的0~160nmol/L浓度范围内,K562细胞的增殖抑制率随BTZ浓度的增加而增加(与对照组比较,p<0.05)。在24~72h内,同浓度BTZ作用于K562细胞的增殖抑制率随作用时间的延长而增加(组间比较p<0.05)。BTZ作用K562细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为91.36nmol/L、44.25nmol/L、20.34nmol/L。2、在HHT的0~320ng/ml浓度范围内,K562细胞的增殖抑制率随HHT浓度的增加而增加(与对照组比较,p<0.05)。在24~72h内,同浓度HHT作用于K562细胞的增殖抑制率随作用时间的延长而增加(组间比较p<0.05)。HHT作用K562细胞24h、48h、72h的半数抑制浓度(IC50)分别为148.92ng/ml、61.48ng/ml、35.65ng/ml。3、20nmol/L BTZ作用K562细胞24h、48h、72h后的增殖抑制率分别为24.29±1.38、38.36±0.97、49.30±1.66(与对照组比较,p<0.001);40ng/m L HHT作用K562细胞24h、48h、72h后的增殖抑制率(%)分别为29.10±1.54、39.78±1.86、50.71±2.26(与对照组比较,p<0.001);BTZ+HHT联合作用K562细胞24h、48h、72h后的增殖抑制率(%)分别为48.58±2.18、69.87±1.86、84.48±1.84。BTZ、HHT单药与联合组比较有差异(p<0.01)。进一步行相互作用分析表明在不同时间点BTZ+HHT联合组增殖抑制率均有IR(BTZ+HHT)>IR(BTZ)+IR(HHT)-IR(BTZ)*IR(HHT)。4、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的早期凋亡率(%)分别为2.36±0.56、8.09±0.81、8.93±0.82、21.13±1.90。BTZ及HHT单药组高于对照组(p<0.05),联合组均高于BTZ、HHT单药组(p<0.05)。5、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的Bcl-2蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、0.77±0.28、0.78+0.04、0.18±0.02(与对照组比较,p<0.05)。BTZ、HHT单药组低于对照组(p<0.05),联合组低于BTZ及HHT单药组(p<0.05)。6、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的Bax蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.77±0.09、2.02±0.09、2.53±0.12。BTZ、HHT单药组高于对照组(p<0.05),联合组高于BTZ及HHT单药组(p<0.05)。7、对照组、BTZ单药组、HHT单药组、联合组K562细胞的Mcl-1蛋白相对表达量分别为1.00±0.00、1.25±0.05、0.75±0.03、0.87±0.02。不同处理组Mcl-1蛋白相对表达量高低:BTZ组>对照组>BTZ+HHT联合组>HHT组(组间比较p<0.05)。结论:1、BTZ、HHT对K562细胞株均有抑制增殖作用,且均呈剂量、时间依赖性。BTZ与HHT联合可起协同抑制细胞增殖效应。2、BTZ、HHT对K562细胞株均有诱导凋亡作用,BTZ与HHT联合诱导凋亡效应更明显。3、BTZ、HHT可下调K562细胞Bcl-2蛋白表达,两药联合时Bcl-2蛋白下调更明显。4、BTZ、HHT可上调K562细胞Bax蛋白表达,两药联合时Bax蛋白上调更明显。5、HHT可通过下调Mcl-1蛋白表达增加K562细胞对BTZ作用的敏感性。