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目的1.探索比较不同样品预处理方法、不同胶条和不同上样量对双向凝胶电泳(2-DE)结果的影响,来优化提高分离小鼠黑质蛋白2-DE技术方案,以便获得分辨率较高和重复性较好的电泳图谱;2.通过比较鱼藤酮和MPTP两种慢性帕金森病(PD)模型小鼠与对照组小鼠黑质蛋白表达谱,找出两种PD模型小鼠共同的差异蛋白,深入探寻PD的疾病特异性蛋白(DSPs),以便可协助PD的早期诊断。方法1.提取正常C57BL小鼠黑质蛋白,以clean-up kit法和TAC/丙酮法对蛋白粗提物进行预处理,选取不同胶条(pH3-10L、pH3-10NL和pH4-7)和不同上样量(80ug、180ug和300ug)进行双向凝胶电泳;2.构建鱼藤酮和MPTP慢性帕金森病小鼠模型以及其各自的对照组1和对照组2,于不同时间点观察各组小鼠是否出现帕金森病样行为改变,并进行行为学评价(open-field test)以及黑质酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化;3.提取鱼藤酮和MPTP组以及各自对照组小鼠黑质蛋白,以clean-up kit法对蛋白粗提物进行预处理,选取pH4-7的胶条和180ug的上样量进行双向凝胶电泳;4.运用PDQuest8.0凝胶图象分析软件对鱼藤酮组与对照组1、MPTP与对照组2的电泳图谱分别进行分析,找出各自的差异表达蛋白;5.利用MALDI-TOF-MS对酶切后的差异蛋白进行质谱分析。将所得到的肽质量指纹图(PMF)进行数据库检索以及生物信息学分析。结果1.正常小鼠黑质双向电泳结果:①与clean-up kit法相比,TAC/丙酮沉淀法预处理后蛋白得率较低,同时丢失了样品中的部分中、小分子蛋白质。②pH3-10L胶条中蛋白点主要分布在中间区域;pH3-10NL胶条对中间区域的蛋白点的分离有所改善;pH4-7胶条中蛋白点分布均匀,横条纹较少。③80ug上样量的图谱背景干净,但点数最少(978);180ug上样量的图谱蛋白点较多(1267),且圆润、清晰,背景干净,分辨率高;300ug上样量的图谱蛋白点虽然最多(1371),但背景较深,部分蛋白点融合,横条纹也较多;2.行为学及免疫组化结果:①与对照组1和对照组2比较,鱼藤酮组和MPTP组小鼠出现竖毛、震颤,自发活动减少和缓慢,对刺激逃避反应低下等表现,且自由活动中移动格子数和站立次数明显减少有显著差异(P<0.05)。②鱼藤酮组和MPTP组分别较对照组1和对照组2小鼠黑质TH阳性细胞数明显减少,且具有显著差异(P<0.05);3.双向电泳及质谱结果:鱼藤酮组与对照组1比较发现有22个差异蛋白,MPTP组与对照组2比较发现有28个差异蛋白,其中有7个为共同的差异蛋白。质谱成功鉴定其中3个共同的差异蛋白:PPP2R1A、吡哆醛激酶、Peroxiredoxin-2。结论1.通过对比发现,使用clean-up kit法对小鼠黑质蛋白粗提物进行预处理,选取pH4-7胶条,采用180ug上样量能获得背景干净、分辨率高的双向电泳图谱;2.采用一种新的蛋白质组学研究模式,在鱼藤酮和MPTP两个慢性PD模型中筛选出3个共同差异蛋白。这些蛋白水平的上调或下调可能与PD的发病密切相关,可作为PD的DSPs。