【摘 要】
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利用v-Src的特性,我们采用基因工程的技术,用PCR扩增得到大量的v-Src基因片段,通过克隆载体pMD18-T,最后转入表达载体pGEX-KT中,该载体包含谷胱苷肽转移酶基因,合适位点插入
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利用v-Src的特性,我们采用基因工程的技术,用PCR扩增得到大量的v-Src基因片段,通过克隆载体pMD18-T,最后转入表达载体pGEX-KT中,该载体包含谷胱苷肽转移酶基因,合适位点插入目的基因后,可表达出目的蛋白与GST(谷胱苷肽转移酶)的融合蛋白,方便了纯化与检测.用IPTG诱导表达蛋白的产生,纯化后获得大量的目的蛋白.经SDS-PAGE凝胶电泳显示,蛋白分子量与预期一致,融合蛋白(GST-Src)为86KD.Western印迹检测呈阳性,证实了目的蛋白的表达.通过该论文,建立了一套良好的质粒构建,蛋白表达体系,为后续工作打下了基础.对v-Src的研究除了结构及理化性质外,还可以利用它与c-Src的三个同源区(SH2,SH3,SH1)进行活性及抗癌药物的检测筛选工作,用高纯度的蛋白还可以产生特异性的单克隆抗体,进行免疫组化的研究.这一工作为国内首创,前景十分广阔,具有很高的实用价值.
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