本文从以下两部分进行了阐述：　　论文Ⅰ白细胞介素增强结合因子3在小鼠、兔和人易损斑块中的表达研究　　目的：　　(1)明确ILF3在小鼠和兔动脉粥样硬化易损斑块中的表达变化情况;　　(2)检测小鼠动脉粥样硬化模型血浆中的ILF3浓度改变;　　(3)阐明ILF3的变化与AS斑块易损性的关系;　　方法：　　第一部分:小鼠颈动脉套管动脉粥样硬化模型　　75只8周龄雄性ApoE-/-小鼠，随机分为以下组:　　A:对照组(Control，n=15):给予普通饲料饮食，12周末结束实验;　　B:颈动脉套管模型组(Cannula，n=15):给予颈动脉套管手术，当天开始高脂饲料饮食，至12周末结束实验;　　C:颈动脉套管模型+辛伐他汀组(Statin+Cannula，n=15):给予颈动脉套管手术，当天开始高脂饲料饮食，从第8周开始给予辛伐他汀(9.4mg/kg/d)治疗，至12周末结束实验;　　D:颈动脉套管模型+联合触发组(Cannula+Triggering，n=15):给予颈动脉套管手术，当天开始高脂饲料饮食，至12周末结束实验，实验结束前给予联合触发以刺激斑块破裂;　　E:颈动脉套管模型+辛伐他汀+联合触发组(Statin+Cannula+Triggering，n=15):给予颈动脉套管手术，当天开始高脂饲料饮食，从第8周开始给予辛伐他汀(9.4mg/kg/d)治疗，至12周末结束实验，实验结束前给予联合触发以刺激斑块破裂。　　第二部分:兔腹主动脉球囊拉伤动脉粥样硬化模型　　50只三月龄雄性纯种新西兰大白兔，随机分为以下组:　　A:对照组(Control，n=10):给予普通饲料，12周末结束实验;　　B:球囊损伤模型组(Balloon-injury，n=10):行腹主动脉球囊拉伤，当天开始给予含1％胆固醇的高脂饮食，12周末实验结束;　　C:球囊损伤模型+辛伐他汀组(Statin+Balloon-injury，n=10):行腹主动脉球囊拉伤，当天开始给予含1％胆固醇的高脂饮食，于8周末开始给予辛伐他汀治疗(3.7mg/kg/d)，12周末实验结束;　　D:球囊损伤+药物触发组(Balloon-injury+triggering，n=10):行腹主动脉球囊拉伤，当天开始给予含1％胆固醇的高脂饮食，于12周末实验结束，实验结束前24h和48h给予两次药物触发注射造成斑块破裂及血栓形成;　　E:球囊损伤模型+辛伐他汀+药物触发组(Statin+Ballooninjury+triggering，n=10)行腹主动脉球囊拉伤，当天开始给予含1％胆固醇的高脂饮食，于8周末开始给予辛伐他汀治疗(3.7mg/kg/d)，12周末实验结束，实验结束前24h和48h给予两次药物触发注射造成斑块破裂及血栓形成。　　结果：　　动物一般情况　　对各组小鼠以及新西兰大白兔处死前称量体重，测量血清TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度，结果显示相比正常饮食对照组，体重有所升高，TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度均升高(P＜0.05)。至实验结束，共1只小鼠死亡，6只新西兰大白兔死亡。最终74只小鼠完成实验，44只兔子完成实验。　　结论：　　(1) ILF3在正常小鼠的心肌、肝、肾组织中表达丰富，在肺和脾中不表达，血管中少量表达;　　(2) ILF3在AS斑块中高表达，且主要表达于巨噬细胞中;　　(3)他汀治疗能降低ILF3在AS斑块中的表达，增加斑块稳定性;　　论文Ⅱ白细胞介素增强结合因子3调节斑块稳定性及其相关机制　　目的：　　(1)建立ApoE-/-小鼠AS模型，观察病毒抑制ILF3表达对AS斑块易损性中的作用;　　(2)探讨ILF3在巨噬细胞脂质沉积及炎症因子分泌中的作用。　　方法：　　设计3对ILF3基因的shRNA质粒，用RT-PCR和蛋白印记法检测干扰效率，选取干扰效率最高的一对序列包装包含绿色荧光蛋白(GFP)报告基因的慢病毒载体。ILF3的目标干扰序列为:5-GCCAATGGACTGAAGTCATGT-3，阴性对照序列为:5-TTCTCCGAACGTGTCACGT-3。　　结果：　　4.1小鼠一般情况　　对各组小鼠处死前称量体重，测量血清TC、TG、LDL-C、HDL-C浓度，结果显示各组小鼠之间各项指标没有差异，说明ILF3病毒转染不影响小鼠体内脂质代谢。　　4.2慢病毒转染效率及病毒转染后ILF3在斑块中的表达　　荧光显微镜下观察病毒转染后斑块组织中GFP的表达，可见有明显的转染绿色荧光蛋白;RT-PCR结果结果显示，NC组ILF3水平和NS组没有统计学差异，LV-ILF3（-）组ILF3表达比NC组显著降低(P＜0.05)。　　4.3 ILF3对动脉粥样硬化斑块成分及易损性的影响　　与对照组相比，sh-ILF3可以降低斑块内脂质和巨噬细胞含量，增加平滑肌和胶原含量，降低斑块易损性(P＜0.05)。　　4.4 ILF3对AS斑块内炎症因子表达水平的影响　　RT-PCR结果显示，LV-ILF3（-）组的IL-6和TNF-α水平显著降低(P＜0.05)。　　4.5小鼠腹腔巨噬细胞的提取(cd68染色)　　成功提取小鼠腹腔巨噬细胞，对其进行巨噬细胞标志物CD68免疫细胞荧光染色，鉴定所提取细胞纯度，＞99％的细胞均为巨噬细胞。　　4.6 ox-LDL对小鼠腹腔巨噬细胞ILF3表达的影响　　分别加入0ug/ml，25ug/ml，50ug/ml，75ug/ml，100ug/ml的ox-LDL，培养C57/B6小鼠腹腔巨噬细胞24h后发现，ox-LDL能浓度依赖性的上调ILF3蛋白的表达。与正常对照组相比，25ug/ml ox-LDL刺激细胞24h后ILF3就可以明显增加(P＜0.01)，100ug/ml作用最强（P＜0.01）。　　以50ug/ml ox-LDL分别刺激小鼠腹腔巨噬细胞0h，4h，8h，12h，24h，48h后，发现ox-LDL能时间依赖性的上调ILF3蛋白的表达。与正常对照组相比，处理4h后ILF3即有明显增加（P＜0.01），24h达到峰值（P＜0.01），并持续至48h。　　4.7巨噬细胞Sh-ILF3转染效率检测　　shRNA-NC和shRNA-ILF3分别转染巨噬细胞，实时定量PCR和Western Blot检测巨噬细胞转染前后ILF3的表达水平变化，结果显示与NC组相比，SI组ILF3在mRNA水平及蛋白水平都显著降低（P＜0.05）。　　4.8 Rosa26-ILF3小鼠腹腔巨噬细胞ILF3表达水平检测　　Western Blot检测C57/B6小鼠腹腔巨噬细胞和Rosa26-ILF3小鼠腹腔巨噬细胞ILF3的表达水平，结果显示ILF3过表达小鼠ILF3水平比C57小鼠显著升高。　　4.9 ILF3促进ox-LDL诱导的巨噬细胞泡沫化　　将C57/B6小鼠腹腔巨噬细胞分为NC组，NC+ox-LDL刺激组，SI+ox-LDL刺激组，检测各组细胞脂ABCA1，ABCG1，SRA1，LOX1，ACAT1在蛋白水平的表达情况。结果显示，ox-LDL刺激巨噬细胞后，与脂质转出相关蛋白ABCA1，ABCG1以及与脂质转入相关蛋白LOX1，ACAT1均有所升高，其中LOX1和ACAT1有统计学意义(P＜0.05)，转染sh-ILF3以后，ABCA1和ABCG1进一步升高但ABCG1达不到统计学差异，LOX1和ACAT1则表达降低（P＜0.05）。对各组细胞刺激后进行油红0染色，结果显示ox-LDL刺激巨噬细胞后脂质沉积增多，转染sh-ILF3后，脂质沉积明显减少。提取C57/B6小鼠以及Rosa26-ILF3小鼠腹腔巨噬细胞，ox-LDL刺激24h后进行油红0染色，结果显示ILF3过表达组脂质沉积明显增多，以上结果说明ILF3具有促进胆固醇沉积的作用。　　4.10 ILF3促进ox-LDL诱导的巨噬细胞炎症因子分泌将C57/B6小鼠腹腔巨噬细胞分为NC组，NC+ox-LDL刺激组，SI+ox-LDL刺激组，检测各组细胞IL-6，iNOS，IL-10，Arg1蛋白水平的表达情况。结果显示，ox-LDL刺激巨噬细胞后，IL-6，iNOS，IL-10均有所升高，,转染sh-ILF3以后，促炎因子IL-6，iNOS表达降低（P＜0.05），而抑炎因子Arg1和IL-10表达进一步升高(P＜0.05)，证明ILF3有促进炎症因子分泌的作用。　　结论：　　(1)敲除ILF3通过调节巨噬细胞向M2转化，抑制斑块中炎症因子表达，增加斑块稳定性　　(2)敲除ILF3能降低巨噬细胞脂质吞噬，增加脂质外流，　　(3) ILF3对巨噬细胞的调节作用是通过NF-κB和AKT信号通路来实现的。