本处方由赤芍、牡丹皮、当归三味药组成,为老中医的经验方,应用于防治更年期综合征,临床效果显著。但是原处方为汤剂,量大,服用不便,不利于广泛应用。拟研制成有效部位制剂——颗粒剂,并符合“五方便”(服用方便、携带方便、生产方便、运输方便、贮存方便)的要求,使得该方能广泛应用。目的:1、对国内外有关组方中赤芍、牡丹皮、当归三味药的研究文献进行分类综述,对目前国内外对赤芍、牡丹皮、当归药材的化学成分及药理作用的主要研究概况加以合理分析。2、对赤芍、牡丹皮、当归中有效部位和有效成分进行提取精制,使其有效部位含量达到总提取物的50%以上。3、开发成安全、临床有效、服用量少、质量稳定可控的新制剂,拟为颗粒剂。4、建立新制剂的质量标准。方法:1、以计算机检索、手工追溯检索等手段相结合,充分利用PubMed、CNKI中国期刊全文文数据库、CBM中国生物医学期刊文献数据库、互联网等工具数据库与工具书,广泛查阅有关中西医对更年期综合征的认识和治疗、本方各单味药材的化学成分、药理作用以及临床应用、现代制剂等资料,对单味药材的研究概况进行科学分析。2、采用乙醇提取法,对赤芍进行提取,再应用大孔吸附树脂对提取物进行精制,得到赤芍总苷。3、采用水蒸气蒸馏法,提取牡丹皮中的丹皮酚。4、采用水蒸气蒸馏法,提取当归挥发油;采用水提醇沉法提取精制当归总多糖。5、采用高效液相色谱法建立快速、科学、稳定的芍药苷含量测定方法,评价有效部位芍药总苷提取工艺的合理性。6、采用高效液相色谱法建立快速、科学、稳定的丹皮酚含量测定方法,评价有效成分丹皮酚提取工艺的合理性。7、采用紫外可见比色法建立快速、科学、稳定的总多糖含量测定方法,评价有效部分总多糖提取工艺的合理性。结果:1、利用各种检索工具、数据库,共查阅文献600余篇;文献多集中在药材的质量、药理药效及临床应用研究;通过综述上述文献,确定了组方各味药材的有效部位和有效成分。2、赤芍总苷提取精制工艺研究以芍药苷为对照品,采用高效液相色谱建立芍药总苷含量测定方法。采用乙醇回流提取法,以芍药苷含量为评价指标,采用正交设计评价提取工艺,最佳提取工艺条件:乙醇浓度为70%,乙醇10倍量,提取2次,每次2 h。赤芍总苷粗提物得膏率为35.75%,芍药苷含量为5.47%,含量较低,转移率为79.14%。根据赤芍总苷成分的性质,采用大孔吸附树脂法精制该粗提物,优化后的精制方法为:采用AB-8大孔吸附树脂(树脂床体积为240ml),赤芍粗提取物加蒸馏水制备成上柱液,吸附速率为4 ml/min,先采用水洗脱除去色素等杂质,再换用20%乙醇继续洗脱,洗脱速度为5～6 ml/min,收集洗脱液,减压除去溶剂,得浸膏,干燥,即得。精制得率为9.14%,总苷含量为50%,转移率为85.70%。3、丹皮酚提取精制工艺研究以丹皮酚为对照品,采用高效液相色谱建立含量测定方法。采用水蒸气蒸馏法提取药材中的丹皮酚,冰箱冷藏过夜,过滤,收集丹皮酚结晶,室温减压干燥,即得。最佳工艺为加15倍量水,收集10倍药材量的馏出液。结果,丹皮酚得率为1.0%,转移率为62.46%,纯度为96.42%。4、当归提取精制工艺研究以葡萄糖为对照品,采用苯酚-浓硫酸显色法建立当归总多糖含量测定方法。采用水蒸汽蒸馏法提取当归挥发油,水提醇沉法精制当归总多糖。提取当归挥发油10h,收集,冷藏备用;续加8倍量的水热回流提取2 h,连续2次,收集水提液,将3次所提取的水提液合并、浓缩,加乙醇醇沉,冷藏过夜,滤过,收集沉淀,干燥,即得。通过比较实验,以70%乙醇浓度醇沉效果最好;按照最佳提取精制工艺制备,当归多糖得率14.30%,多糖含量为61.59%。5、制剂成型工艺研究按照汤剂中的比例组成有效部位制剂,制备颗粒剂,进行了成型工艺的相关尝试。首先把芍药总苷和当归多糖混合均匀,用无水乙醇制软材,制颗粒,干燥到水分含量尽可能少;丹皮酚和当归挥发油用无水乙醇溶解后,喷洒加入到颗粒中,密闭干燥容器内闷4天,再放减压干燥器中放置3-5天,即得。6、制剂含量标准研究6.1制剂中总有效部位含量测定方法研究根据待测量有效部位性质,对供试品以不同方法预处理,采用苯酚浓硫酸显色后紫外分光光度法对当归多糖测定,每克颗粒含当归多糖463.9mg。采用高效液相色谱法对赤芍总苷进行测定(以芍药苷含量进行估算),每克颗粒含赤芍总苷81.0mg。6.2制剂中有效成分含量测定方法研究采用高效液相色谱法建立了丹皮酚有效成分含量测定方法,进行方法学考察,结果结果表明精密度、重现性、稳定性均符合要求,每克颗粒含丹皮酚51.9mg。结论:围乐颗粒的提取工艺稳定、科学可行,并达到了预期的有效部位制剂质量标准要求:新制剂的含量测定方法准确可行。