椪柑核中柠檬苦素类似物和黄酮类化合物的研究

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本论文以椪柑核为原料,建立了分光光度法快速测定柠檬苦素类似物和黄酮类化合物的方法,探讨了两种物质的提取工艺条件,并对大孔树脂分离纯化工艺进行了初步探究,最后通过高效液相色谱与质谱联用技术对椪柑核中柠檬苦素和黄酮类化合物作了定性分析。其主要研究结果如下:1.采用分光光度法建立了椪柑核中柠檬苦素类似物、黄酮类化合物含量的测定方法。以Ehrlich试剂作显色剂,确定柠檬苦素标准液最大吸收波长为490nm,建立线性回归方程:Y=0.0037X-0.0370,相关系数R2=0.9931;利用NaNO2-Al(N02)3-NaOH为黄酮显色体系,在波长510nm处,芦丁标准品溶液标准曲线:Y=0.0121X+0.0147, R2=0.9995。2.研究了椪柑核中柠檬苦素类似物的提取、分离纯化条件。采用水溶助剂法进行提取,以水杨酸钠为提取溶剂,柠檬苦素类似物得率为考察指标,通过单因素试验和正交试验,确定柠檬苦素类似物提取的最佳条件为:提取时间6h,提取溶剂浓度2mo1/L,提取温度40℃,料液比1:20(g/mL)。在此条件下椪柑核柠檬苦素类似物的得率为4.21%。极差分析表明,各因素对椪柑核中柠檬苦素类似物得率的影响顺序为:料液比>提取剂浓度>提取时间>提取温度,方差分析显示料液比对试验结果有显著性影响。在柠檬苦素类似物分离纯化过程中,选择AB-8、NKA-9、D101、D4020四种大孔树脂对椪柑核中柠檬苦素类似物的吸附率、吸附量和解析率进行比较。结果表明,D4020型大孔树脂对椪柑核中柠檬苦素类似物较其他三种树脂有较高的吸附率(46.52%)和解析率(96.11%),比较适用于椪柑核中柠檬苦素类似物的分离纯化。动态吸附与解析试验得出,D4020大孔树脂分离纯化椪柑核中柠檬苦素类似物的最佳条件为:吸附流速1.0mL/min,样液浓度1.48mg/mL,5BV用量的70%的乙醇溶液作为洗脱剂,解析流速1.0mL/min。3.研究了椪柑核中黄酮类化合物的提取、分离纯化条件。以乙醇为提取溶剂,黄酮类化合物得率为考察指标,通过单因素试验和正交试验,确定黄酮类化合物提取的最优条件为:料液比1:25(g/mL),提取时间2.5h,乙醇浓度80%,提取温度70℃,在此条件下椪柑核中黄酮类化合物的得率为5.81%。极差分析表明,各因素对椪柑核中柠檬苦素类似物得率的影响顺序为:乙醇浓度>料液比>提取时间>提取温度,方差分析显示乙醇浓度对试验结果有显著性影响。在黄酮类化合物分离纯化过程中,选择AB-8、NKA-9、D101、HP-20四种大孔树脂对椪柑核中黄酮类化合物的吸附和解析效果进行比较。结果显示,AB-8大孔树脂较其他三种树脂有较高的吸附率(58.29%)和解析率(79.71%),比较适合于椪柑核中黄酮类化合物的分离纯化。动态吸附与解析试验得出,AB-8大孔树脂分离纯化椪柑核黄酮类化合物的最佳条件为:吸附流速1.0mL/min,样液浓度0.26mg/mL,5BV用量的80%的乙醇溶液作为洗脱剂,解析流速1.0mL/min。4.采用Agilent1100Series LC/MS液质联用仪对纯化后样品中的柠檬苦素类物质和黄酮类化合物进行了定性分析。在柠檬苦素类似物分析过程中,选取柠檬苦素、诺米林作为标准样品,最终通过色谱的保留时间和质谱对标准品、提取样品对比分析,在柠檬苦素类物质提取样品中检测出了柠檬苦素、诺米林两种物质,两者的保留时间分别为27.0min、31.7min,峰面积分别为2754.19mAu、1634mAu,柠檬苦素含量高于诺米林。在黄酮类化合物的定性分析中,选取柚皮苷、新橙皮苷、橙皮苷、橙皮素作为标准样品,最终通过色谱的保留时间和质谱对标准品、黄酮类化合物提取样品进行对比分析,在黄酮类化合物提取样品中检测出含有橙皮苷,其含量较高,保留时间为21.8min,但其他三种物质未检出。
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