电针对大鼠粘连性肠梗阻小肠上皮细胞保护作用的机理研究

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粘连性肠梗阻(Adhesive Intestinal Obstruction,AIO)是由于腹腔内粘连导致肠道内容物通过障碍的一种疾病,是临床常见的急腹症之一,也是各类肠梗阻中最常见的一种。它是普外科常见且棘手的问题,给许多患者造成极大痛苦和经济负担。目前临床无一种公认的、有效的方法来预防腹腔粘连的发生。因此,积极探讨对AIO的有效预防是当今医学领域研究的重要课题之一。本文从中医针灸学的角度对此病进行系统探讨,拟从以下两个方面进行研究。1.文献研究从现代医学对AIO的认识,指出AIO与肠上皮细胞有密切的关系,肠上皮细胞在AIO的发病中占有重要地位。小肠是维持人体正常生理活动的重要器官,担负着消化、吸收、分泌、排泄和免疫防疫等功能。各种损伤、感染、梗阻、缺血等因素均可以引起不同程度的小肠屏障功能障碍。肠梗阻的初期肠道平滑肌出现相应肌动力学的变化,增强蠕动,克服梗阻,随梗阻时间延长,梗阻对肠道的血液循环、酶学、离子平衡及代谢的不良反应会逐渐加重。肠腔内压力增高,小肠能量代谢功能衰竭,肠管逐渐膨胀,肠壁张力增加,压迫粘膜下血管导致小肠粘膜微循环障碍,小肠组织供氧进一步减少,组织氧合不良,肠上皮细胞破坏受损,肠屏障功能丧失,终致肠功能衰竭。现代医学对本病主要是采取手术治疗和特殊药物腹腔内灌注为主,如透明质酸钠、尿激酶、脂肪乳剂等。从中医对粘连性肠梗阻的病因病机、辨证论治认识的阐述以及对针灸治疗本病的回顾,指出中医对腹部疾病的生理、病理认识历史久远。但有关粘连性肠梗阻的病名、病因病机、辨证论治,古医籍中则无系统的专门论述,而散见于“腹痛”、“积聚”、“关格”等范畴。中医针灸疗法方法多样,如针刺、艾灸、中药灌肠、推拿按摩等,其治疗AIO显示出良好的疗效,导师张家维在针灸治疗内科疑难疾病的研究中积累了丰富的经验,这些为探讨针灸治疗粘连性肠梗阻提供了坚实的理论基础。在回顾中西医有关粘连性肠梗阻的认识后,指出探讨针刺对粘连性肠梗阻的预防机制,具有坚实的理论基础及重要的临床意义。2.实验研究目的:从动物实验角度探讨针刺对粘连性肠梗阻的预防机制。方法:将75只SD大鼠,随机分为5组:正常组、假手术组、模型组、中药灌肠组、针刺组。针刺组取穴:足三里(双)、天枢(双)、上巨虚(双),每天针刺一次,每次30min;灌肠组用大承气汤,按照5ml/kg剂量保留灌肠,模型组、假手术组用生理盐水保留灌肠,用量为5ml/kg,每天一次,以上各组实验动物分别在造模术后14天处死,观察以下指标:(1)各组大鼠小肠肠粘连Phyllips分级、上皮细胞损伤chiu分级;(2)各组大鼠小肠光镜下病理形态学的改变;(3)各组大鼠小肠超微结构变化(细菌包涵体细胞和粗面内质网囊液腔计数):(4)各组大鼠小肠上皮细胞内Ca2+含量的变化;(5)各组大鼠小肠上皮细胞线粒体功能的变化(6)各组大鼠小肠上皮细胞组胺酶的活性;(7)各组大鼠小肠上皮细胞氧自由基的变化;结果:(1)模型组大鼠腹腔内粘连处数多,粘连紧密,扭曲成团,部分肠段出现近端肠管扩张,远端肠管缩窄变细的粘连性肠梗阻的改变。术后各组与假手术组比较,粘连分级均有增加;针刺组和灌肠组肠粘连分级显著低于模型组(P<0.01):造模后各组Chiu分级均较对照组明显升高,模型组损伤最为严重,与正常组、假手术组相比,具有明显差异(P<0.01),灌肠和针刺防治后,肠粘膜损伤减轻,较模型组差异具有统计学意义(P<0.05)。(2)模型组可见光镜下模型组肠上皮细胞严重损伤,可见肠腔内可见多量变性红细胞和脱落变性肠上皮细胞,绒毛排列紊乱、萎缩变短、间距增宽、间质充血水肿,大部分上皮细胞脱落,绒毛破损伴有固有层毛细血管大量暴露,固有层水肿,中等量炎细胞浸润,小肠绒毛水肿,固有层血管充血,肠腔炎性渗出,灌肠和针刺后粘膜损伤改善明显。(3)造模14天后,细菌包涵体细胞和粗面内质网囊液腔计数数量增多,针刺或灌肠治疗后梗阻均有显著减少。术后小肠粘膜上皮细胞微绒毛减少,线粒体和粗面内质网明显减少,炎性细胞浸润增多。针刺能明显改善肠梗阻时小肠上皮细胞的损伤,促进线粒体和粗面内质网功能和形态恢复。(4)在造模术后,与假手术组相比,正常组上皮细胞内Ca2+与其无统计学差异(p<0.05)。模型组上皮细胞内Ca2+明显高于假手术组,差异显著(p<0.01)。灌肠组、针刺组均使上皮细胞内Ca2+明显降低(P<0.01或P<0.05)。(5)与假手术组相比,模型组肠上皮细胞线粒体三态呼吸(ST3)降低,四态呼吸(ST4)升高,线粒体呼吸控制率(RCR)均下降(P<0.011);灌肠组以上指标均有所改善,但仍不如正常对照组好;针刺治疗后,ST3升高,ST4降低,RCR均升高,与模型组比相差非常显著(P<0.01),与正常对照组相比差别不显著。(6)模型组小肠DAO水平明显低于假手术组,血浆DAO水平明显高于假手术组,差异显著(P<0.01);针刺组经针刺干预后,小肠DAO提高,较模型组有统计学差异(P<0.05),血浆DAO降低,较模型组均有显著差异(P<0.05)。正常组和假手术组DAO较稳定,两者差异无显著性(P>0.05)。(7)大鼠造模术后肠粘膜和血浆中MDA含量明显升高,SOD显著下降。粘连性肠梗阻大鼠针刺后,血浆和肠粘膜中的NO、MDA含量低于模型组,SOD高于模型组,并随治疗时间的延长,其水平逐渐趋于正常。结论:(1)针刺能够改善大鼠小肠炎症,降低肠粘连Phyllips分级、肠上皮细胞损伤chiu分级,改善肠粘膜粘连情况。(2)针刺能明显改善肠梗阻时小肠组织超微结构的损伤,促进线粒体和粗面内质网功能和形态恢复,减少细菌包涵体细胞和粗面内质网囊液腔的数量,保持肠上皮细胞的完整性。(3)针刺能降低上皮细胞内钙离子超载,改善线粒体呼吸功能,减轻肠上皮细胞损伤。(4)针刺能抗氧自由基损伤,降低肠二胺氧化酶,保护肠道屏障功能。
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