【摘 要】
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贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)是一种具有多种药理活性的多年生草本植物,但近年来其野生资源逐年减少,人工栽培产量和质量也难以满足产品生产的需求。因此,不定根培养就成为获取贯叶连翘新植物材料的重要途径。目前,贯叶连翘不定根生物反应器培养体系已建立,但不定根的药理活性尚不清楚,这影响着不定根的在产品生产中的应用。因此,本研究以生物反应器培养的贯叶连翘不定根为材料,利用闪式提取
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贯叶连翘(Hypericum perforatum L.)是一种具有多种药理活性的多年生草本植物,但近年来其野生资源逐年减少,人工栽培产量和质量也难以满足产品生产的需求。因此,不定根培养就成为获取贯叶连翘新植物材料的重要途径。目前,贯叶连翘不定根生物反应器培养体系已建立,但不定根的药理活性尚不清楚,这影响着不定根的在产品生产中的应用。因此,本研究以生物反应器培养的贯叶连翘不定根为材料,利用闪式提取法对提取工艺进行了优化,进而用不同极性的溶剂对粗提物进行萃取,研究了粗提物及不同萃取物的抑菌和抗生物膜的作用,为今后将不定根应用于相关产品的生产提供理论依据。提取溶剂筛选试验结果表明,甲醇对不定根黄酮的提取效果好于乙醇和水。因此,以甲醇为溶剂,在单因素实验中对提取时间、提取溶剂浓度及液料比的最佳水平进行了筛选,进而利用响应面法进行三因素和三水平的实验设计,对提取条件进行了优化,其优化条件为提取时间65.44 s,甲醇浓度77.46%,液料比52.13m L g-1,此条件下提取物中黄酮得率高达10.57%。抑菌研究结果表明,不定根粗提物(CE)和石油醚(PET)、二氯甲烷(DCM)、乙酸乙酯(Et OAc)、正丁醇(n-Bu OH)、水(AQE)萃取物对六种供试菌(枯草芽孢杆菌、蜡样芽胞杆菌、金黄色葡萄球菌、猪霍乱沙门氏菌、铜绿假单包杆菌、大肠埃希氏菌)均有不同程度的抑菌作用,其中PET与DCM综合抑菌活性最强,且对枯草芽孢杆菌,蜡样芽胞杆菌,金黄色葡萄球菌的抑制效果最佳。因此,本研究进而探究了PET和DCM对此三种菌细胞通透性和呼吸代谢的影响。结果表明,PET与DCM处理增加了三种菌细胞内AKP酶、电解质、核酸和蛋白质的泄漏,表明菌细胞渗透性的增加。PET与DCM处理后,三种菌的呼吸受到明显抑制,但两种萃取物参与调控的呼吸代谢途径不同。即,PET影响枯草芽孢杆菌的戊糖磷酸(HMP)途径,蜡样芽胞杆菌和金黄色葡萄球菌的三羧酸循环(TCA)途径;DCM影响枯草芽孢杆菌的HMP途径,蜡样芽胞杆菌己糖二磷酸(EMP)途径,金黄色葡萄球菌的EMP和HMP两种途径。在抗生物膜研究中,CE、PET、DCM、Et OAc、n-Bu OH、AQE中,n-Bu OH的抗生物膜综合能力最强,尤其是对枯草芽孢杆菌和猪霍乱沙门氏菌生物膜有较强的清除能力,且对生物膜内细菌也具有杀伤能力。本研究结果表明贯叶连翘不定根具有良好的抑菌和抗生物膜作用,因此,不定根作为原材料应用于抑菌及抗生物膜相关产品生产具有极大的可行性。
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