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第一部分汉族白细胞介素-8-251A/T,-353A/T和+396T/G基因多态性与乳腺癌易感性研究背景:1 人们生活节奏逐渐加快,乳腺癌发病率日趋增加,现阶段乳腺癌发病机制不明了,主要病因为环境因素以及遗传因素。在乳腺癌发生及发展过程中,机体免疫系统表现出一定的作用。IL-8作为调节因子存在于免疫系统中,其基因单核苷酸多态性对基因转录以及蛋白质表达有着一定的影响,其作用于免疫系统进而影响肿瘤的发生、发展。2 随着生物工程与分子生物学技术的不断发展,基因分析技术广泛应用于对乳腺癌生物特性的研究,使乳腺癌的治疗进入了基因治疗时代,有大量的研究表明,乳腺癌有特有的基因位点。通过相应基因位点与乳腺癌易患因素等相关的分析,以便制定个体化的治疗方案,为提高乳腺癌的治疗效果提供重要的参考。3 白细胞介素-8(Interleukin-8,IL-8)是一种在人体生理代谢、病理发生发展过程中发挥着重要作用的细胞因子,研究表明该因子在恶性肿瘤的发生、发展及转移等诸多过程中均起到重要作用,并参与了恶性肿瘤供血血管的生成。目的:1 通过对乳腺癌和同期相同数量正常人群IL-8-251位点、-353位点、+396位点进行随机对照研究,分析各个位点与乳腺癌的相关性,为乳腺癌的防治提供新的基因型。2 通过对乳腺癌和同期相同数量正常人群IL-8与年龄、体重指数、月经初潮时间、体育锻炼和生育哺乳时间等与乳腺癌的发生进行研究分析,为乳腺癌的防治提供新的思路。方法:本实验主要使用了病理-对照研究方法,在研究对象方面主要选择了内蒙古自治区人民医院和武汉大学人民医院就诊的411例中国汉族乳腺癌患者和411例健康对照组,基于此展开流行病学调查。获取患者的外周静脉血,提取患者基因组DNA,病例组和对照组使用PCR技术对IL-8基因-251位点、-353位点以及+396位点的单核苷酸多态性进行分析。然后分析基因型在病例组和对照组的分布情况,本实验主要使用了χ2检验、Logistic回归等方法,对多种基因型和乳腺癌发病风险关联性展开研究。乳腺癌组和正常对照组均利用EDTA抗凝管采集外周静脉血,从全血中用苯酚氯仿法提取染色体DNA,每个标本分别用NanoDrop和凝胶电泳法定性和定量的检测DNA,检测后放置-80℃C低温储存。IL-8-251,-353和+396基因杂交后被扩增:扩增后用2%的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。结果:1 选择411例乳腺癌病例以及411例健康对照组;病例组年龄均值为57.47±9.69岁,对照组年龄均值为58.10±8.55岁;两组的绝经状况、生育史、母乳喂养情况、吸烟、饮酒史差别没有统计学意义。病例组平均体重指数23.42±3.07(kg/m2),对照组为22.10±3.14(kg/m2);病例组初潮平均年龄为12.48±2.24岁,对照组为13.41±2.60岁;病例组有着更低的体育锻炼情况;病例组首次怀孕平均年龄为25.73±3.24岁,对照组为24.77±3.24岁;病例组母乳喂养时间为5.27±2.71月,对照组为6.34±2.87月;病例组激素使用史有91例,对照组有58例;病例组激素使用时间为8.33±3.30月,对照组为4.38±1.63月,差异具有统计学意义。2 -251A/T位点TT基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为38.69%,TA基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为43.55%,AA基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为17.76%;健康对照组中,TT基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为50.36%,TA基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为39.42%,AA基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为10.22%。差异具有统计学意义。3 -353A/T位点TT基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为47.69%,AT基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为40.39%,AA基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为11.92%;健康对照组中,-353A/T位点TT基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为48.66%,AT基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为43.07%,AA基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为8.27%,差异具有统计学意义。4 +396T/G位点TT基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为86.86%,TG基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为12.17%,GG基因型频率在乳腺癌病例组中所占的比重具体为0.97%;健康对照组中,+396T/G位点TT基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为89.05%,TG基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为10.46%,GG基因型频率在健康对照组中所占的比重具体为0.49%,差异无统计学意义。结论:IL-8 251A/T基因位点多态性在很大程度上关联中国汉族女性人群乳腺癌易感性,突变的A等位基因让女性乳腺癌有着更高的患病风险,将其视为分子标志进行筛选。IL-8-353A/T、+396T/G基因位点多态性实验结果显示并不关联中国汉族女性人群乳腺癌发病风险。第二部分白细胞介素-8与白细胞介素-10基因多态性与乳腺癌易感性相关性的Meta分析目的:乳腺癌易感性即在同一生活条件下,只有少数女性被确诊为乳腺癌。SNP即单个核苷酸序列发生改变,出现大量遗传标记,进而使基因组序列出现多态性。本文主要对白细胞介素IL-8 251A/T和IL-10 819T/C多态性与乳腺癌易感性之间的关联进行详细研究,为乳腺癌的防治提供重要的参考。方法:将查阅文献、数据分析、Q检验和12统计等多种调查和分析方法进行结合。PubMed、中国知网以及EMBASE中存在大量关于IL-8和IL-10多态性以及乳腺癌相关资料,通过文献质量对比筛选,得到与研究内容相关的资料以及数据,文献检索于2018年1月25日截止。将分析得到的数据通过STATA 12.0软件实现统计学分析,主要从两个指标对IL-8 251A/T和IL-10 819T/C基因多态性与乳腺癌易感之间的联系进行研究,两个指标分别为基因模型比值合并值(Odds,ratio)OR)及95%置信区间(confidence intervals,CI),并且分别从种族以及对照组两个层次进行分析。通过对数据进行Q检验和12统计来得到研究的异质性,除此之外还要进行敏感性分析,最终采用Begg’s漏斗图以及Egger’s检验来进行偏倚评价。结果:1 对IL-8与乳腺癌二者之间的关联进行Meta分析得到:IL-8基因多态性与乳腺癌易感性并无明显联系;从种族层次进行相关性分析,结果证明携带T等位基因的人群与乳腺癌易感性二者为负相关(T vs.A:OR=0.73,95%CI = 0.62-0.86;TT vs.AA:OR = 0.54,95%CI=0.40-0.74;AT+TT vs.AA:OR = 0.73,95%CI =0.57-0.95;TT vs.AT+AA:OR = 0.60,95%CI = 0.46-0.77);从对照组层次进行相关性分析,结果证明携带T等位基因的人群与乳腺癌易感性二者同样为负相关(Tvs.A:OR = 0.03,95%CI = 0.70-0.98;AT+TT vs.AA:OR = 0.78,95%CI = 0.65-0.94)。除此之外,各基因型遗传模型不具有明显的发表偏倚,在一定程度上证明上述分析得到的结果较为可靠。2 对IL-10与乳腺癌二者之间的关联进行Meta分析得到:IL-10基因多态性与乳腺癌易感性并无明显联系;并且不论是种群层次还是对照组层次,分析结果都表明各基因型遗传模型与乳腺癌之间都无显著相关性(C vs.T:OR=1.02,95%CI =0.90-1.16;TC vs.TT:OR = 1.04,95%CI = 0.86-1.26;CC vs.TT:OR = 1.11,95%CI=0.85-1.44;TC+CC vs.TT:OR = 1.04,95%CI = 0.87-1.25;TT vs.TC+TT:OR =1.02,95%CI = 0.82-1.27),此外不具有显著发表偏倚,这在一定程度上证明上述分析得到的结果较为可靠。结论:对数据进行Meta分析后得到IL-8 251A/T和IL-10 819T/C基因多态性与乳腺癌的易感性并无显著关联;但是从种族以及对照组两个层次都表明IL-8的基因型TT与乳腺癌之间有着直接联系。此次研究存在着一定的局限性,因此得到的结论仍然需要进行深入检验。