论文部分内容阅读
目的：1.运用Meta分析的方法系统评价DAPK、RASSF1A和p16基因异常甲基化与肝细胞癌易感性的关系。2.探讨beclin1、DAPK、RASSF1A及p16抑癌基因启动子异常甲基化及联合检测在肝细胞癌早期诊断中的价值。方法：1. Meta分析：⑴通过计算机检索Pubmed、EMBASE、Ovid、Web of science、中国生物医学文献数据库(CBM)、中文科技期刊全文数据库（VIP）、中国期刊全文数据库(CNKI)、万方数据库等，获取DAPK、 RASSF1A和p16基因异常甲基化与肝细胞癌病例对照研究的相关文献。⑵根据纳入与排除标准筛选文献并提取数据，运用RevMan5.2软件进行统计分析。2.临床病例研究：⑴收集泸州医学院附属医院肝胆外科2012年4月—2013年6月收治并进行手术切除的肝细胞癌（HCC）患者组织37例，同时选取肝细胞癌患者相应匹配非癌组织（noncancerous tissue，NCT）（距离癌组织＞3cm），以及5例正常肝组织（取自手术治疗的肝血管瘤旁组织）。⑵采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR，MSP）法，检测37例肝癌组织、相应匹配非癌组织及正常肝组织中beclin1、RASSF1A、p16和DAPK四种基因启动子区甲基化状态。⑶通过与外周血甲胎蛋白AFP的单一ROC曲线分析及其逐步Logistic回归的ROC曲线下面积，对单一及组合方式的敏感性、特异性、Youden指数和阳性似然比/阴性似然比进行比较分析。结果：1.Meta分析：⑴共纳入研究文献31篇， DAPK基因纳入3项研究，累计病例314例，其中HCC组134例，对照组180例；RASSF1A基因纳入15项研究，累计病例1417例，其中HCC组710例，对照组707例；p16基因纳入23项研究，累计病例2245例，其中HCC组1106例，对照组1139例。⑵癌组织中DAPK甲基化阳性率显著高于正常肝组织[OR=6.69，95%CI （2.43~18.41）， P<0.05]，相比癌旁组织[OR=0.87，95%CI（0.47~1.59），P>0.05]与肝硬化组织[OR=0.21，95%CI（0.01~8.56），P>0.05]并无显著性差异；RASSF1A在肝细胞癌组织中甲基化阳性率均显著高于正常肝组织[OR=50.23，95%CI（22.21~113.61）、P<0.05]、癌旁组织[OR=7.63，95%CI（3.38~17.22），P<0.05]及肝硬化组织[OR=17.18，95%CI（2.57~114.91），P<0.05]；p16在肝细胞癌组织中甲基化阳性率均显著高于正常肝组织[OR=21.18，95%CI（9.75~46.00），P<0.05]、非癌组织[OR=7.97，95%CI（4.64~13.68），P<0.05]及肝硬化组织[OR=6.18，95%CI（4.16~9.18），P<0.05]。2.临床病例研究：⑴肝癌组织中beclin1、RASSF1A、p16和DAPK基因启动子区甲基化检出率分别为5.4%、94.6%、73.0%和35.1%，相应癌旁组织中甲基化率分别为0%、35.1％、24.3％和10.8％，5例正常肝组织均未检出基因甲基化改变。RASSF1A、p16和DAPK基因在肝细胞癌组织中的甲基化率均明显高于相应的癌旁组织(P<0.05)。⑵肝癌组织中beclin1、RASSF1A、p16和DAPK基因的甲基化发生率与患者性别、年龄、肿瘤TNM分期以及有无HBV感染均无显著性差异，但RASSF1A异常甲基化在肿瘤体积较大者组织中检出率更高（χ2=6.578，P＜0.05），DAPK基因甲基化在AFP＜400μg/L的肝癌患者组织中阳性率更高(χ2=5.106，P＜0.05)。⑶RASSF1A基因启动子区甲基化和AFP联合检测可获得较高的敏感度(81.8%)和特异度(93.0%)，曲线下面积最大（0.913），并获得高于单一基因甲基化的特异性、Youden指数、阳性似然比/阴性似然比。结论：1.经Meta分析得出，DAPK、RASSF1A和p16基因异常甲基化与肝细胞癌发生发展密切相关。2. RASSF1A基因甲基化，p16基因甲基化在肝细胞癌组织中具有较高的阳性率，且RASSF1A基因启动子区甲基化和AFP的联合检测，是早期诊断肝细胞癌的可靠指标，有望成为较佳的组合肿瘤标志物。3. RASSF1A基因甲基化与肿瘤大小有关，其病理发生机制有待进一步研究验证。4.自噬基因beclin1内含子2区甲基化在肝癌中的阳性率较低（5.4%）不适宜做肝癌临床诊断指标。