采用硫酸铵沉淀、Blue Sepharose CL-6B亲和层析和Phenyl Sepharose CL-4B疏水层析的方法从亚洲玉米螟幼虫血淋巴中纯化得到酚氧化酶原(PPO)。PPO的纯化倍数为369.85,回收率为35.34%。纯化的PPO蛋白经天然凝胶电泳及二维电泳分析测得其全酶相对分子量约为158 kDa,由两个亚基组成,其中一个亚基分子量为80 kDa,pI为5.70,另一个亚基分子量为78 kDa,pI为6.50。纯化的PPO其氨基酸组成与大蜡螟酚氧化酶原相似。苯基硫脲、硫脲、二硫苏糖醇和乙二胺四乙酸强烈抑制酚氧化酶(PO)活性,二乙基二硫代氨基甲酸酯和三乙基四胺六乙酸对PO活性抑制不显著,邻菲罗啉和乙二醇二乙醚二胺四乙酸不能抑制PO活性。与对照相比,Mg2+和Cu2+处理能够增加PO活性。Mg2+和Cu2+处理使PPO中?-折叠含量显著增加。采用电感耦合等离子质谱(ICP-MS)测得纯化PPO中镁和铜元素含量分别为5.674±2.294μg/mg和1.257±0.921μg/mg,结果表明PPO是一种含铜镁的金属蛋白。将纯化的PPO蛋白分5次免疫,注射入Balb/C健康乳鼠皮下,ELISA检测制备的多克隆抗体效价,Western杂交分析该抗体的免疫特异性,采用间接免疫荧光标记法对PPO进行细胞定位观察,并采用胶体金标记的免疫电镜对PPO进行组织定位观察。结果表明:2只免疫鼠的pAb间接ELISA效价均高达10-5,其中第2号小鼠pAb效价最高为1:4.08×104。Western杂交显示获得的PPO多克隆抗体具有相对较高的特异性,间接免疫荧光法表明亚洲玉米螟5龄幼虫PPO主要由类绛色细胞和粒细胞合成。免疫电镜结果表明亚洲玉米螟5龄幼虫中肠和体壁组织中金颗粒呈团状、点状分布,明显有PPO分布。