第一部分PCR-DGGE探究抗生素应用对早产儿生后1周肠道菌群多样性变化的影响【目的】利用16S rDNA PCR及变性梯度凝胶电泳技术,探讨延长经验性抗生素应用对早产儿早期肠道菌群多样性的影响。【方法】以2014年1月至2015年6月在重庆医科大学附属儿童医院住院治疗的早产儿为研究对象,根据抗生素使用情况分为青霉素+拉氧头孢组(PM组)、哌拉西林他唑巴坦组(PT组)和非抗生素组(AF组)。收集胎粪(<12 h)和3、5、7日龄(d3、d5、d7)的粪便标本,采用PCR-DGGE方法对肠道菌群多样性的变化进行动态观察。【结果】36例早产儿的144份粪便标本纳入分析,每组各12例,三组间基线具可比性。36份胎粪提取细菌DNA后行PCR扩增失败,未行DGGE分析。(1)非抗生素组(AF组)d3、d5、d7时点的Shannon指数中位数(P25-P75)分别为1.39(0.94-1.94)、2.24(2.07-2.49)和2.38(2.07-2.61);哌拉西林他唑巴坦组(PT组)各时间点Shannon指数分别为1.64(1.16-1.92)、1.97(1.69-2.20)和1.22(0.69-2.10);青霉素+拉氧头孢组(PM组)分别为0.68(0-1.78)、1.78(1.47-1.94)和1.69(1.53-2.09)。d3时点3组间Shannon指数无明显差异;d5时点PM组的Shannon指数显著低于AF组(P<0.05);d7时点PM组及PT组的Shannon指数均显著低于AF组(P<0.05)。(2)3个时间点,PM组与PT组Shannon指数均无明显差异(P>0.05)。(3)随日龄增加,AF组Shannon指数逐渐升高;而PT组Shannon指数呈降低趋势。【结论】生后延长经验性抗生素应用会降低早产儿早期肠道菌群多样性,不同抗生素产生影响的时间点不同,抗生素应用3天内对菌群多样性影响较小。第二部分高通量测序探讨抗生素应用对早产儿肠道菌群种属组成变化的影响【目的】利用高通量测序探索生后延长经验性抗生素应用对早产儿早期肠道菌群群落结构的影响【方法】选取哌拉西林他唑巴坦组、青霉素+拉氧头孢组及非抗生素组3组患儿日龄3天及7天的粪便细菌DNA标本进行高通量测序,测序结果进行相关生物信息学分析。【结果】36例早产儿的72份粪便细菌DNA标本纳入分析,其中1份标本PCR扩增失败,无法进行测序。(1)物种多样性结果显示:d3及d7时点,3组间Shannon指数均无明显差异,但青霉素+拉氧头孢组(PM组)及哌拉西林他唑巴坦组(PM组)d7时点的Shannon指数低于其自身d3时点的水平(P<0.05)。(2)分类学分析结果示早产儿菌群结构简单,以厚壁菌门及变形菌门占主要地位。(3)d3时点,三组间群落结构较相似;而d7时点,与非抗生素组(AF组)相比,PM及PT组假单胞菌属及链球菌属比例明显升高,而克雷伯菌属、韦荣球菌属、梭菌属及柠檬酸菌属比例明显降低(P<0.05),肠球菌属在PT组比例明显升高(P<0.05),而杆菌属在PM组比例有明显升高(P<0.05)。【结论】延长经验性抗生素应用会改变早产儿肠道菌群结构,导致肠球菌、链球菌等致病菌过度生长。不同抗生素对菌群结构影响不同,且应用3天内对菌群结构影响较小。