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目的:为探讨褪黑素对高糖环境下Müller细胞的抗氧化保护作用,我们观察体外培养Müller细胞中褪黑素膜受体(MT1/MT2)的表达及在高糖环境下的变化,并观察褪黑素及其膜受体拮抗剂(Luzindole)对高糖环境下Müller细胞合成核因子2相关因子(Nrf-2)和亚铁血红素氧化酶(HO-1)的影响,初探褪黑素防治糖尿病视网膜病变的前景。
方法:(1)酶消化法分离培养大鼠Müller细胞,细胞免疫荧光法鉴定细胞性质和纯化度。(2)培养细胞分为正常糖对照组、高糖组和甘露醇对照组,逆转录PCR检测褪黑素膜受体表达及变化。(3)培养细胞分为正常糖对照组、甘露醇对照组、、褪黑素+正常糖组、高糖组、褪黑素+高糖组及褪黑素+高糖+Luzindole组。逆转录PCR检测核因子2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor2,Nrf-2)、亚铁血红素氧化酶(hemeoxygenase-1,HO-1)的的表达及改变。
结果:(1)酶消化法体外分离培养大鼠Müller细胞纯化度达95%以上。(2)褪黑素膜受体MT1和MT2在正常糖对照组、甘露醇对照组、高糖组均有表达,高糖刺激组表达明显高于对照组(P<0.05)。(3)褪黑素对正常糖刺激下Müller细胞Nrf-2和HO-1合成无明显影响;高糖刺激下Nrf-2和HO-1表达增加,褪黑素诱导下表达增加显著,褪黑素膜受体阻滞剂Luzindole干预下褪黑素的诱导作用被抑制。
结论:大鼠Müller细胞的褪黑素膜受体MT1和MT2在高糖刺激下表达增加;褪黑素可能通过受体介导诱导高糖刺激下Nrf-2和HO-1表达增加。褪黑素可能通过其受体在糖尿病视网膜病变中起到重要的抗氧化作用。