电针刺对内毒素休克兔肾损伤中Keap1-Nrf2/ARE通路的影响

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内毒素血症(endotoxaemia)是临床上严重创伤、感染后的常见并发症,也是急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)和多脏器功能不全综合征(multiple organ dysfunction syndrome,MODS)的常见因素。内毒素性急性肾损伤被认为是预测危重症患者病情发生发展及预后的独立危险因素。大量研究表明电针刺对肾功能有一定的保护作用,但具体机制尚不清楚。目的:本研究拟通过电针刺激足三里穴和肾俞穴来探讨电针刺对内毒素性急性肾损伤肾脏的保护作用及其与Keap1-Nrf2/ARE通路的关系。方法:清洁级健康成年雄性新西兰大白兔,体质量1.5-2.0kg,采用随机数字表法将其随机分为4组(n=10):对照组(C)、内毒素性急性肾损伤组(AKI)、电针刺+内毒素性急性肾损伤组(EA)、非穴位电针刺+内毒素性急性肾损伤组(SEA)。所有动物以20%乌拉坦(1g/kg)腹腔注射麻醉,保持自主呼吸,右侧颈内动脉置管监测动脉血压。从耳缘静脉注射脂多糖(LPS)5mg/kg建立兔内毒素性急性肾损伤模型,给予LPS后2h血压下降至基线值的75%及以下为内毒素性AKI模型制备成功的标准。EA组刺激参数:疏密波,频率15Hz,刺激强度以兔出现轻微肌颤为度,实验前5天每天电针刺足三里、肾俞穴1次,每次持续10min,留针1h出针;实验时电针刺从模型建立持续至实验结束。SEA组选择针刺组穴位旁开0.5cm部位,刺激参数和时问同EA组。LPS注射6小时后,从颈动脉采血样5m1,经膀胱取尿液2m1。采用全自动生化分析仪测定血清尿素氮(BUN)、肌酐(Cr)、尿α1微球蛋白(α1MG)的浓度。采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清肿瘤坏死因子α(TNF-a)和白细胞介素10(IL-10)浓度。将兔放血处死取肾脏,左肾用多聚甲醛固定,采用苏木素伊红(HE)染色法,观察肾组织病理学改变并评分(HSK),测定。肾组织含水率(WCR)。右肾迅速放入冻存管液氮中速冻,后放入-80℃中保存。制取肾组织匀浆,采用黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物岐化酶(SOD)活性,采用硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)含量。Western blot法测定肾组织Nrf2核蛋白、Nrf2,总蛋白、HO-1蛋白表达。RT-PCR法测定Nrf2mRNA、HO-1mRNA.结果:与C组比较,AKI、EA、SEA组血清BUN、Cr、TNF-α、IL-10、尿α1-MG、HSK评分、WCR、MDA含量均升高,SOD活性降低,Nrf2mRNA、 HO-1mRNA、Nrf2核蛋白、Nrf2总蛋白、HO-1蛋白的表达均上调(P<0.05);与AKI组比较,EA组血清BUN、Cr、TNF-α、尿a1-MG、HSK评分、WCR、MDA含量均降低,血清IL-10浓度、SOD活性升高,Nrf2mRNA、HO-1mRNA、 Nrf2核蛋白、Nrf2总蛋白、HO-1蛋白的表达均上调(P<0.05);与EA组比较,SEA组血清BUN、Cr、TNF-α、尿a1-MG、HSK评分、WCR、MDA含量均升高,血清IL-10浓度、肾组织SOD活性降低,Nrf2mRNA、HO-1mRNA、Nrf2核蛋白、Nrf2总蛋白、HO-1蛋白的表达均下调(P<0.05)。结论:电针刺激足三里和肾俞穴可减轻内毒素性AKI兔肾脏损伤程度,其机制可能与激活keapl-Nrf2/ARE通路,上调肾脏HO-1的表达相关。
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