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省沽油(Staphylea bumaldaDC)是多年生落叶灌木或小乔木,是我国珍稀的特种木本油料树种。本论文主要包含两部分的内容:(1)省沽油ISSR-PCR反应体系的建立以及引物的筛选;(2)基于ISSRs的安徽省省沽油资源的遗传多样性研究。 采用正交试验设计和单因素分析,建立并优化了省沽油的ISSR-PCR反应体系。结果显示,省沽油ISSR-PCR最适反应体系为模板DNA(5-10 ng·μL-1)1.0μL、dNTP(10mmol·L-1)0.3μL、引物(10μmol·L-1)0.5μL、Mg2+(25mmol·L-1)2.5μL、TaqDNA聚合酶(5 U·μL-1)0.3μL、10×PCR缓冲液2.5μL、HPLC超纯水12.9μL,反应体系总体积为20.0ul。PCR扩增程序为:94℃预变性,5 min;42个循环:94℃变性45 s;54.0~55.3℃退火30 s,72℃延伸90 s;最后72℃延伸7 min,4℃保存。利用上述已建立和优化的ISSR-PCR反应体系,从80条ISSR引物中筛选出条带清晰、多态性高、稳定性好的引物共14条。 利用ISSR分子标记技术,对安徽省6个省沽油居群共138个样本树木在221个多态性位点上进行了遗传多样性分析。结果表明,在物种水平上,省沽油多态性位点百分率PPLS=100.00%,有效等位基因数nes=1.210,Nei,s基因多样性指数(期望杂合度)Hes=0.157,Shannon多态性信息指数Is=0.276;在居群水平上,各居群平均多态性位点百分率PPLp=38.76%,有效等位基因数nep=1.185,Nei,s基因多样性指数Hep=0.114,Shannon,s多态性信息指数Ip=0.176;居群间遗传分化系数Gst=0.276;分子方差分析AMOVA显示,省沽油居群间与居群内遗传变异分别占总遗传变异的43.07%和56.93%,表明省沽油的遗传变异主要体现在居群内个体间的遗传差异,但居群间也呈现了高度的遗传分化;UPGMA聚类分析可将6个省沽油居群明显区分开来,且表明分组情况与居群的地理分布没有必然的关联;另外,本研究还发现了一些省沽油种源特异性条带,可用于种源鉴定。本研究结果将为建立安徽省省沽油的遗传资源档案,现有种质资源的科学保护、交流和永续利用,以及为今后的杂交育种工作中亲本的选配提供可靠的理论依据和实践指导。