两个甘蓝型油菜基因BnbZIP和BnHSP的克隆和表达分析

来源 :南京农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sparkman007
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逆境相关基因在植物的抗逆境过程中发挥着重要作用,本研究克隆了两个油菜逆境相关基因,分别是亮氨酸拉链蛋白(Leucine zipper protein gene,BnbZIP),热激蛋白基因(Heat shock protein gene,BnHSP)分析了它们的序列特征和表达模式,构建了油菜的过表达载体,并获得了油菜转化体,为进一步研究BnbZIP和BnHSP在植物中的功能奠定了基础。主要研究结果如下:1.油菜亮氨酸拉链蛋白基因(BnbZIP)①在甘蓝型油菜中克隆了一个bZIP基因,命名为BnbZIP,其开放阅读框(ORF)长为534 bp,编码177个氨基酸,氨基酸分子质量为19875.1,等电点为6.91,半衰期为30小时,亲水性为-0.934。②在油菜基因组中共搜索到192个油菜bZIP基因,基因CDS长度由153个核苷酸到1908个核苷酸不等,平均长度为816个核苷酸,基因的编码长度从43个氨基酸到601个氨基酸不等。③通过对油菜、白菜、甘蓝、拟南芥等多个物种的bZIP基因构建进化树分析表明,bZIP基因家族在进化中比较保守,油菜bZIP与拟南芥bZIP的亲缘关系最近。④BnbZIP基因在油菜各组织均有表达,7天下胚轴中表达量最高,其次为7天子叶,开花期茎秆中表达最少。⑤构建了BnbZIP的过表达载体,利用农杆菌介导的花序侵染法转入"中双11号"油菜,获得8株过表达BnbZIP基因的T0代单株。2.油菜热激蛋白基因(BnHSP)①在甘蓝型油菜中克隆了一个HSP基因,命名为BnHSP,其开放阅读框(ORF)长为2364 bp,编码787个氨基酸,氨基酸分子质量为89563.9,等电点为4.97,半衰期为30 h,亲水性为-0.593。②在油菜基因组中搜索到87个油菜HSP基因,基因CDS长度由96个核苷酸到2925个核苷酸不等,平均长度为1122个核苷酸,基因的编码长度从31个氨基酸到973个氨基酸不等。③通过对白菜、甘蓝、拟南芥等多个物种的HSP基因构建进化树分析表明,油菜与白菜的亲缘关系最近。④BnHSP在油菜各组织均有表达,花器官中的表达量较高,其次为茎秆和幼嫩角果,7天下胚轴中表达量最低。⑤构建了BnHSP的过表达载体,利用农杆菌介导的花序侵染法转入"中双11号"油菜,获得了 10株过表达BnHSP基因的T0代阳性转化体。
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