基于网络药理学方法研究加味蜂房丸治疗乳腺炎的作用机制

来源 :内蒙古医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tcwf2009
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目的:采用网络药理学的方法对院内制剂加味蜂房丸治疗乳腺炎的作用机制进行研究,寻找蜂房丸中治疗乳腺炎的有效化合物或有效化合物群;基于网络药理学研究的结果,以黄芩苷为标准品测定网络药理学预测到的有效化合物群-黄酮类化合物含量;采用病理组织学验证金葡菌乳腺炎模型小鼠的抗炎、抑菌作用,以荧光定量PCR验证其作用机制的关键靶点。方法:(1)在传统中药数据库TCMSP、TCM@TANWAN、中国知网,收集加味蜂房丸中的主要化合物成分,预测作用靶点;Dis Ge NET、CTD、Drug Bank和genecards数据库中收集治疗乳腺炎疾病的作用靶点;找出共靶导入到Metascape数据库进行关键靶标功能富集分析。(2)以黄芩苷为标准品运用紫外分光光度法测定总黄酮的含量,采用正交实验法优化加味蜂房丸10味药材总黄酮的提取方法。(3)以注射给菌的方式建立小鼠乳腺炎模型,依据临床症状评分及病理组织学标准评判造模成功与否;小鼠攻菌后分组给药,观察小鼠的临床症状及病理组织学特征,荧光定量PCR进行关键靶标及化合物的验证。结果:(1)网络药理学分析结果:加味蜂房丸治疗乳腺炎的主要通路为inflammatory responce、response to molecule of bacterial origin通路,关键靶标有ALB、TP53、PIR3CA、MAPK1、SRC、MAPK3、JUN、VEGFA、IL-8、EGFR、TNF、TLR,化合物以黄芩苷、山奈酚、槲皮素、木犀草素、高良姜素为主,该类化合物均为黄酮类化合物。(2)加味蜂房丸提取工艺优化结果:以黄芩苷为标准品测定黄酮类化合物的含量,提取工艺优选为6倍量70%乙醇,加热回流3次,每次1h方法提取总黄酮含量最高,且提取方法具有可靠性、准确性。(3)小鼠金葡菌乳腺炎模型的建立及药效学观察:依据HE染色结果优选注射给菌方式造模,但同时需严格控制针头进入乳腺组织的位置;根据临床病理学评分,病理组织学观察评价疗效,发现加味蜂房丸制剂的醇提液为最佳治疗效果。实验验证结果:加味蜂房丸醇提液可显著抑制TLR2的表达,激活ALB的表达,可有效地降低金葡菌性乳腺炎的炎症损伤,降低炎性细胞因子的分泌,在金葡菌乳腺炎发生中表现出显著抗炎作用。结论:优选的加味蜂房制剂的醇提工艺能够很好的治疗金黄色葡萄球菌感染的乳腺炎,抑制TLR2,激活ALB作用的inflammatory responce、response to molecule of bacterial origin通路,“加味蜂房丸”可有效地增强金葡菌性乳腺炎时乳腺组织及中性粒细胞对金葡菌的杀灭作用。
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