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目的:间充质干细胞(mesenchymal stemcells, MSCs)是具有自我更新和跨胚层多向分化潜能的一类干细胞,具有粘附性,能够在体外进行扩增,目前仍未发现MSCs具有特异的细胞表面抗原,一般认为MSCs表达间质细胞抗原,而不表达造血干细胞相关表面抗原、MHCⅡ类抗原及共刺激分子。动物实验及临床试验的研究结果表明,造血干细胞移植时联合输入MSCs可缩短造血干细胞植入及中性粒细胞、血小板恢复的时间、且减少移植排斥及GVHD的发生率及严重程度,因此在造血干细胞移植领域MSCs具有良好的研究价值和应用前景。本研究旨在分离、培养和鉴定脐带血间充质干细胞,并分析其支持脐血CD34+细胞体外扩增的能力及机制,为脐带血间充质干细胞应用于造血干细胞移植提供实验依据及理论基础。方法:1.密度梯度离心法分离培养与体外扩增脐带血间充质干细胞;2.通过流式细胞术检测间充质干细胞表面抗原及多向分化诱导对其进行鉴定;3.脐带血间充质干细胞与造血干细胞共培养,观察造血干细胞扩增及集落形成情况;4. RT-PCR法检测脐带血间充质干细胞粘附分子及细胞因子mRNA的表达;5. ELISA法对脐带血间充质干细胞培养上清细胞因子进行检测结果:1.成功由脐带血中分离培养出梭形、成纤维样间充质干细胞;2.脐带血间充质干细胞阳性表达CD44、CD29、CD90、CD166、CD73、CD105、CD13、CD59和HLA-ABC等抗原,阴性表达CD45、CD34、CD14, CD31和HLA-DR等抗原;3.脐带血间充质干细胞能够分化为成骨和脂肪细胞;4.造血干细胞数与集落数在只有间充质干细胞滋养层组、只添加外源性细胞因子组和间充质干细胞滋养层联合添加外源性细胞因子组(共同培养组)均能够扩增,而共同培养组扩增最显著,差异具有统计学意义(P<0.05)5.脐带血间充质干细胞中能够检测出CD54, CD166, CD56, CD44, CD49d, SDF-1, CXCR4, CD106,IL1α, IL1β, IL6, IL7, IL8, IL11, M-CSF, GM-CSF, FLT3LG和LIF等多种分子mRNA的表达。6.脐带血间充质干细胞培养上清中检测到GM-CSF, IL-7, IL-8, IL-11, SCF和SDF-1α等细胞因子结论:脐血间充质干细胞作为细胞滋养层能够支持CD34+细胞体外扩增。脐血间充质干细胞所表达分泌的细胞因子及黏附分子在CD34+细胞体外扩增中具有重要作用。这一结论为推广脐血间充质干细胞的临床应用提供了实验依据。