帕金森病是好发于中老年人的慢性中枢神经系统变性疾病，严重影响中老年人的生活质量和健康水平。目前PD的发病机制仍不清楚，临床也缺乏理想的治疗药物。一般认为其主要的病理改变是黑质纹状体多巴胺能神经元缺失后引起的BG直接通路活性的减低和间接通路活性的增强，使得丘脑和皮层神经元受到过度抑制，从而出现震颤、肌僵直、运动减少和姿势不稳等一系列的临床症状。因此，降低间接通路的活性是治疗PD的主要目标，这可以通过增强多巴胺能神经传导或者降低谷氨酸能传导来达到。 Glu是中枢神经系统中主要的兴奋性神经递质，其受体包括iGluRs和mGluRs。近年来iGluRs在帕金森病的发生、发展过程中的作用已被广泛研究，并提出了兴奋性氨基酸的神经毒性作用可能是PD发生与发展的重要机制之一。许多研究指出iGluRs的拮抗剂具有抗PD作用，但是由于该组受体分布不具有特异性，应用后伴随着严重的副反应。近年来，mGluRs在神经传导中的作用越来越受到重视，研究指出，mGluRs受体可能是治疗PD的重要靶标。 mGluRs是一类与G蛋白偶联而调节磷脂代谢或腺苷环化酶活性的新型谷氨酸受体，随着分子生物学技术的发展和应用，各亚型mGluRs的cDNAs相继被克隆成功，有关mGluRs对中枢神经系统的调节作用的研究也逐渐受到人们的重视。根据其分子结构、药理学特性和信号转导机制的不同分为三组八个亚型：第Ⅰ组包括mGluR1和mGluR5，与Gq蛋白偶联，主要通过活化PLC，促进PIP₂水解和IP₃产生，导致细胞内Ca⁺⁺的释放；第Ⅱ组包括mGluR2和mGluR3；第Ⅲ组有mGluR4，mGluR6，mGluR7和mGluR8，Ⅱ、Ⅲ组mGluRs均与Gi／Go蛋白偶联，通过抑制AC减少抑制cAMP的生成，进而抑制蛋白激酶A。 南京医科大学硕士学位论文 近年来，随着mGluRs特异性激动剂和桔抗剂的出现，许多研究者开士台探索mGluAs各亚型在调节中枢神经系统功能中的作用。研究表明，mGluRs受体激活后可以调节谷氨酸能和非谷氨酸能突触部位的递质释放，而且直接调节谷氨酸释放的突触前 mGluRs和定位于突触后膜上的mGluRs都可以调控神经元信号转导。越来越多的神经化学研究也指出，mGluRs参与脑内 DA和m 释放的调节。众所周知，BG部位DA和m 神经传导的异常在PD的发病机制中占据重要地位，合理调节DA和m 的释放将有助于切断PD发病的环节。但在PD动物模型和调节神经递质释放的角度阐述mGluRs与PD相关性的研究至今未见报道。本文工作在建立6－OHDA致＊模型大鼠和PD细胞模型的基础上，应用在体微透析的方法研究 mGluRs受体的激动剂或桔抗剂对纹状体 DA和o 水平的影响及其 mGluns配基对 6－OHDA诱导的 PC12细胞死亡和 Gill释放的影响，旨在阐明mGluRs与PD发生的相关性，为进一步探索PD的病因学、研制新一代治疗PD的药物积累学术与实验依据。第一部分 mGluRs配伙 6－OHDA所致 PD模型大鼠砍体 DA和Gh扔的形响一在附透析实柱目的：在6－OHDA单侧损毁的PD大鼠模型上研究各组二受体配基对纹状体细胞外液DA和m 水平的影响。方法：使用立体定位技术将神经毒素6－0＊＊A旧 … 注入大鼠一侧黑质致密部制备单侧 PD大鼠模型。三周后皮下注射APO门刀5 mgilig)观察大鼠的旋转行为，筛选成功的帕金森病大鼠模型进行实验。在成功模型大鼠双侧纹状体植人套管，大鼠恢复一周后沿套管插人探针，用人工脑脊液灌流给药。模型大鼠分为三组，分别给予1组mGluRs桔抗剂DL－AP3(、30、300 pmol·L刁入 11组 mGluRs激动剂 DCG4V（0．l、l、10兄 100 pmol工一’）和二 组 mGluRs激动剂 L一AP4（ 0．l、l气 10、100卜mol工－’人收集的微透析样品采用 HPLC－电化学检测和 HPLC－荧光检测联用的方法测定 DA、Gin水平的变化。结果：I组 mGluRs桔抗剂 DL－AP3对健侧纹状体细胞外 DA和 GltJ水平均无显著影响， 南京医科大学硕上学位沦文但可显著增加患侧纹状体细胞外DA含量达扣％门0、300 11mOI·L－’入并显著降低细胞外Gin水平；11组mGIuRs受体激动剂DCGJV①．l、＊＊卜mol·L“’）可显著增加双侧纹状体细胞外液DA和m 水平二 Ill组受体激动剂 L－AP4在 100卜mol·L－‘时使健侧纹状体细胞外 DA水平降低约 16％，l刁 pmol工”’的卜Ap4均显著增加患侧纹状体的 DA水平；卜AP 4可显著降低双侧纹状体细胞外的mu水平。结估：1组 mGluRs桔抗剂和＊、Ill组 mGluRs的激动剂能显著增力。PD模型大鼠患侧纹状体细胞外液 DA含量，并显著降低患侧纹状体细胞外液的 Gin水平，表明 1组 mGluRs桔抗剂和＊、Ill组 mGluRs的激动剂对PD具有治疗学价值。第H部分 ＊、Ill组mGIuRs没动剂对6－OHDA诱导的PC12细胞死亡和＊ 释放的o响目 的：研究 mGluRs是否对6刁HDA诱导的 PC12细胞毒性有保护作用。方法二分别用 DCG一IV （ 0 pmol·L一’）或 L一AP4 （ 0 pmol·L”’）预处理K12细胞2