特种蛇类养殖目前成为广西农村新兴的致富产业,但是随着养殖规模的扩大和养殖方式的改变,蛇类的疾病也日渐增多,严重地影响和制约着蛇类养殖规模、生产水平和经济效益。为了对蛇类细菌性疾病的病原进行调查,保障广西特种养蛇的健康发展,本研究采用细菌分离法,在无菌条件下,将病蛇的心、肝、肺等实质器官接种于鲜血琼脂培养基上,37℃培养24h,分离到30株细菌。其中未能纯培养的有13株,可纯培养的有17株,经革兰氏染色,13株为革兰氏阴性细菌,4株为革兰氏阳性细菌。纯培养的17株细菌在营养琼脂培养基、SS营养琼脂培养基、麦康凯营养琼脂培养基上表现不同的生长形态。采用PCR方法,提取分离纯化的细菌基因组DNA,利用细菌16S rRNA序列通用引物16S-1492R和16S-27F进行扩增和测序,获得菌株16S rRNA基因序列,用NCBI-BLAST软件将测序序列在Genbank数据库中进行同源性检索,初步确定细菌的种属。再根据菌株在生化反应管中的特征性反应对细菌种属进行确定。鉴定结果表明,17株细菌中,5株大肠杆菌,1株摩根氏菌,3株彭氏变形杆菌,1株奇异变形杆菌,2株粪肠球菌,1株节杆菌,1株绿脓杆菌,1株嗜麦芽寡养单胞菌,1株肠道沙门氏菌,1株产气杆菌。通过对蛇源细菌的分离鉴定,为测定其致病力,指导临床合理用药,防治疾病提供了基础与参考依据。