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背景和目的:迄今为止,临床上尚无针对未足月胎膜早破(pretermpremature rupture of membranes,PPROM)治疗的理想方法。如何延长胎膜破裂至分娩的时间是改善 PPROM 围产儿预后的关键问题。如果胎膜破口能够愈合或修复,则可能恢复羊膜腔的内环境,从而延长孕周,提高新生儿成活率,减少围产儿病率。通过修复胎膜破口来治疗PPROM 将是 PPROM 治疗的崭新技术。本研究通过建立胎膜破裂的体外试验模型,筛选出封闭胎膜破口最佳效果的血纤维蛋白支架的成分组成;然后以纤维蛋白凝块为支架构建人羊膜上皮细胞(HAEC)生长模型,观察 HAEC 在纤维蛋白支架上生长情况和细胞生长因子包括碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、转化生长因子β1 (TGF-β1)、表皮生长因子(EGF)对羊膜上皮细胞生长的影响;再通过 HAEC 定量损伤模型,观察羊膜上皮细胞损伤后在纤维蛋白支架及细胞生长因子(bFGF、TGF-β1、EGF)作用下的修复情况。从而为纤维蛋白支架及细胞生长因子修复 PPROM 破口在临床的应用提供实验依据。 方法:(1)收集妊娠 31~36 周的胎膜及羊水,设计胎膜破裂的体外实验模型和构建纤维蛋白支架的不同凝血成分配方,分为 A、B、C、D、E 5 组,对人工制造的标准胎膜破口进行封闭,记录每组羊水渗漏干净或停止渗漏的时间,每次实验结束,取纤维蛋白凝块及周边胎膜组织,观察局部的组织学形态,从而筛选出最佳封闭效果的纤维蛋白支架成分配方。 (2)在体外构建的纤维蛋白支架上培养 HAEC,采用倒置显微镜、重庆医科大学硕士研究生学位论文 3吉姆萨(Giemsa)染色和扫描电子显微镜观察 HAEC 的生长情况。采用脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)法检测EGF、bFGF 和 TGF-β1 对纤维蛋白支架上 HAEC 凋亡的影响。(3)环钻钻切 HAEC 培养板,建立 HAEC 定量损伤模型,用制备的纤维蛋白块覆盖环钻钻切范围,分别加入不同浓度的 EGF、bFGF和 TGF-β1,Giemsa 染色倒置显微镜观察 HAEC 生长移行情况,5-溴脱氧尿苷(BrdU)掺入法检测 HAEC 的增殖效应。结果:(1)各组羊水渗漏干净或停止渗漏的中位数时间分别为:A组 19.83min;B 组 3956.00min;C 组 2988.50min;D 组 2670.00min;E组 4200.00min,对照组(羊水)2.99min。B、C、D、E 组羊水渗漏时间显著长于 A 组(p<0.05)。唯有 E 组存留剩余羊水,破口处可见纤维蛋白凝块,纤维蛋白凝块与周边的胎膜紧密相连。(2)HAEC 在纤维蛋白支架上生长良好。EGF 组和 bFGF 组 HAEC凋亡较对照组明显减少(p<0.05),TGF-β1 组 HAEC 凋亡较对照组明显增加(p<0.05)。(3)各组细胞均能移行通过环钻缺损处向纤维蛋白块上生长,EGF、bFGF 组移行速度快,细胞数量多;对照组次之;TGF-β1 组最少。10ng/ml～80ng/ml 的 EGF 各浓度组 HAEC 增殖效应均明显大于对照组(P<0.05),20ng/ml 组明显大于其它各浓度组(P<0.05);5ng/ml～80ng/ml 的 bFGF 各浓度组 HAEC 增殖效应均明显大于对照组(P<0.05),40ng/ml 组细胞增殖率最高。TGF-β1 有效抑制效应浓度0.8ng/ml～12.8ng/ml(P<0 .05)。结论:(1)采用凝血成分体外构建的纤维蛋白支架可封闭胎膜破口,其中冷沉淀、凝血酶、抑肽酶、氯化钙 4 种成分是构建纤维蛋白支架的较好配方。