论文部分内容阅读
前言 细胞凋亡对于多细胞生物体的发育和稳态的维持是至关重要的，细胞凋亡异常在许多人体恶性肿瘤的发病学上占有十分重要的地位。凋亡抑制蛋白（inhibitor of apoptosis protein，IAP）家族是重要的凋亡抑制剂。Survivin是IAP家族的新成员，保留了IAP分子结构中最为关键的BIR2（baculovirus IAP repeat）功能区，能直接抑制凋亡途径的终末效应蛋白Caspase-3、7，是迄今为止发现的最强的凋亡抑制因子。 Survivin基因位于染色体17q25，表达产物是一种胞浆蛋白。Survivin蛋白表达于胚胎和发育的胎儿组织，不见于终末分化的成人组织（子宫内膜、胸腺和胎盘除外），但在几乎所有恶性肿瘤组织中均有广泛的表达。同时，Survivin的表达还具有细胞周期依赖性，在G1期不表达，而在G2／M期高表达，因而与细胞增殖密切相关。许多证据提示Survivin在肿瘤发病学上有重要的意义。Bcl-2和p53是迄今为止研究得最深入、广泛的肿瘤相关基因，与细胞凋亡密切相关。 胰腺癌是较常见的消化系统恶性肿瘤之一，早期诊断困难，手术切除率低。目前胰腺癌的发病机制仍不十分清楚，有关Survivin基因与胰腺癌的相关报道甚少，其与Bcl-2、p53表达的关系尚未明了。为此，我们检测Survivin在胰腺癌中的表达及其与Bcl-2、p53基因表达的相关性，并探讨其意义，从而为胰腺癌的诊断和治疗提供一种新的思路。 材料和方法 1、研究对象 选择临床病理资料齐全的中国医科大学附属一院、二院普外科手术切除、病理证实为胰腺癌的蜡块标本50例，其中男26例，女24例；年龄35刁7岁，平均陶7．7。7．4)岁；组织学分化：高分化18例，中分化20例，低分化12例；局部淋巴结转移：有26例，无24例；根据1997年国际抗癌协会（UICC）制定的TNM分期标准进行临床分期：I期14例，11期12例，皿期14例＊期周例。另取5例慢性胰腺炎和12例正常胰腺蜡块标本作为对照。 二．主要试剂 羊抗人Survivin单克隆抗体为美国Santa Cruz公司产品，小鼠抗人h－2单克隆抗体及P53单克隆抗体均为福州市迈新生物技术开发公司产品。 3．兔疫组织化学染色门P法) 将蜡块制成 5 pm厚的切片。选取一张进行常规 HE染色，确定组织学诊断及分化程度。检测Survivin8cl－2o53在胰腺组织中的表达，步骤如下：石蜡切片常规脱蜡至水；抗原修复：0．olMPH6．0 N椽酸盐缓冲液高温高压 1．5分钟；分别用 3％H尸。和非免疫血清阻断内源性过氧化物酶活性并封闭非特异性结合位点；滴加一抗（SUrV ZvZn：200稀释人4℃过夜；生物素标记的二抗37℃孵育30分钟一P复合物37℃孵育30分钟；DAB显色；苏木素复染3分钟；盐酸酒精分化二一3秒；脱水＼透明、中性树胶封片。已知阳性的乳腺癌切片作阳性对照，PBS缓冲液代替一抗作阴性对照。 4．结果判定： Smivin和Bcl－2均表达在细胞浆护3表达于细胞核，分别 ·2·以细胞浆或细胞核染为淡黄色至棕黄色，染色强度明显高于背景者为阳性；无黄色染色且显色强度与背景无明显差别者为阴性。 5．统计学分析：采用 X’检验，P＜0．05被视为显著性标准。 研究结果 互．Survivin蛋白在胰腺癌中的表达： S。ivin蛋白表达于肿瘤细胞胞浆中，在胰腺癌组织中表达阳性率为76．0％橱8乃0厂在慢性胰腺炎及正常胰腺组织中不表达，与胰腺癌组织相比差异显著河北．01人 2．Survivin蛋白的表达与胰腺癌临床病理特征的相关性 在胰腺癌组织中，Survivin基因的表达与胰腺癌的组织学分化、淋巴结转移和临床分期均无明显相关性（P＞O．05人 3．胰腺癌中Survivin基因表达与Bcl－2小53蛋白表达的相关性 BCI－2蛋白表达于细胞浆，在胰腺癌中阳性率为32．0％门／50入S。ivin在 Bcl－2阳性和阴性者中的表达率分别为 75．0％门2／16）和76．5％（26／34），两者差别无显著性瞩＞O．05），吕Sur－vivin与Bcl－2的表达无明显相关性。p53蛋白表达于细胞核中，在胰腺癌中表达率为58．0阮（29／50）。Survivin在p53表达阳性和阴性者中的表达率分别为 89．7％p6／29)和 57．l％厂2／2人两者差异有显著性评＜0．05X即 Survivin与 P53表达密切相关。 讨 论 Survivin是IAP家族的新成员，是迄今发现的最强的凋亡抑制因子，其作用机制是直接抑制了凋亡途径的终末效应蛋白酶C肪pase－3和Caspase—7。 ·3· Survivin在人和鼠的胚胎和胎儿期表达丰富，在大多数终末分化的成人组织中（子宫内膜、胸腺和胎盘组织除外）不表达，但在几乎所有的恶性肿瘤组织中均可检测到Survivin mRNA和蛋白的表达。本研究通过免疫组织化学染色方法检测Survivin基因在胰腺癌组织中的表达率为76．0％p8乃0X而在胰腺非肿瘤性（正常胰腺和慢性胰腺炎）组织中不表达，二者有显著性差异(P＜O．of人