苦瓜性别分化的AFLP及SCAR分子标记的研究

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苦瓜(Momordica charantia.L)是葫芦科苦瓜属一年生植物,雌花与雄花同株。苦瓜是一种重要的蔬菜,在全国广泛栽培,具有药用价值。   近年来,随着分子生物学技术的发展和应用,分子辅助育种被提出,它可以弥补传统育种的不足,加速育种进程及提高其准确性,而DNA分子标记辅助选择则能大大的提高选育准确性和效率。   本试验选用苦瓜品种为全雌性(X黑-d-d)苦瓜和强雄性泰国苦瓜为双亲杂交获得F1,F1与全雌性(X黑-d-d)苦瓜回交,回交获得BC1为实验材料,采用AFLP技术,获得了一条与苦瓜性别连锁的标记,并把该标记成功转化为SCAR标记。主要研究结果如下:   1、建立了适宜苦瓜AFLP分析的技术体系。   本试验以苦瓜为材料,通过对AFLP反应体系中酶切-连接三种方法比较,预扩增产物稀释倍数进行优化,建立了适宜苦瓜的AFLP体系,可用于苦瓜的遗传研究。   2、应用128对引物组合对苦瓜全雌性、强雌性和弱雌性三个基因池进行筛选,引物组合E10/M14在全雌性基因池中扩增出一条分子量为270bp的特异性条带。   3、将该特异性条带回收、克隆、测序,设计SCAR分子标记引物。利用该引物对已知性别的全雌单株88株,强雌单株66株,弱雌单株88株进行盲测,在供试88份全雌单株中85份能扩增出长度为270bp的特异性片段,准确率达到96.6%,在供试的66份强雌单株和88份弱雌单株中未能扩增出特异性片段,说明标记转化成功。
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