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埃博拉病(Ebola virus disease,EVD),旧称埃博拉出血热(Ebola hemorrhagic fever,EHF),是由丝状病毒科的埃博拉病毒(Ebola virus,EBOV)引起的一种出血性、类流感样症状的人兽共患病。2014年,该病毒的扎伊尔型引起的西非埃博拉疫情,传播疫区数和死亡人数都为史上最多。GP蛋白是埃博拉病毒的重要结构蛋白,在病毒毒力、入侵、诱导中和抗体产生等方面发挥重要作用。本研究制备了埃博拉病毒GP蛋白的单克隆抗体,构建了表达GP蛋白的重组杆状病毒,并通过动物实验对其免疫原性进行了研究,以期为埃博拉病毒的诊断方法与疫苗研究奠定基础。具体内容如下:1.EBOV GP蛋白单克隆抗体的制备和鉴定根据DNA Star分析,构建能表达GP蛋白1-300个氨基酸的表达质粒pKGGP-300。在转化、诱导表达、包涵体纯化等步骤后,获得纯度较高的截短GP蛋白。通过BALB/c小鼠免疫,细胞融合,ELISA检测,多次亚克隆筛选后,获得能稳定分泌特异性的抗EBOV GP蛋白单抗的杂交瘤细胞株,分别为:1C1、2A3、2G7、2H9。其亚型和轻链均为IgG1、Kappa。经IFA、Western Blot验证,4株单抗均能与埃博拉病毒GP蛋白发生特异性反应。2.表达GP蛋白的重组杆状病毒构建及其免疫原性研究用含EBOV GP基因的质粒作为模板,通过PCR扩增并将其克隆至转移质粒pFAST-HT-B中。利用位点特异性转座作用,获取含GP基因和杆状病毒基因组的质粒。随后转染Sf9(Spodoptera frugiperda cell)昆虫细胞,拯救出了重组杆状病毒Bacmid-EBOV-GP。通过IFA、Western等方法,验证了该GP基因能在Sf9细胞中高效表达。随后,将该重组杆状病毒免疫小鼠,血清特异性抗体效价实验和淋巴增殖实验表明,该重组杆状病毒可以诱导被免疫小鼠产生特异性体液和细胞免疫反应。